Водорастворимые порфирины и фталоцианины как модификаторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ

Мочалова, Вера Сергеевна АВТОР
кандидата химических наук УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
Москва МЕСТО ЗАЩИТЫ
2006 ГОД ЗАЩИТЫ
   
02.00.02 КОД ВАК РФ
Диссертация по химии на тему «Водорастворимые порфирины и фталоцианины как модификаторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе»
 
Автореферат диссертации на тему "Водорастворимые порфирины и фталоцианины как модификаторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе"

На правах рукописи

Мочалова Вера Сергеевна

ВОДОРАСТВОРИМЫЕ ПОРФИРИНЫ И ФТАЛОЦИАНИНЫ КАК МОДИФИКАТОРЫ В ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ И КАПИЛЛЯРНОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ

02.00.02 - аналитическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва - 2006

Работа выполнена на кафедре аналитической химии химического факультета Московского государственного университета им М.В. Ломоносова.

Научный руководитель-

кандидат химических наук, доцент Брыкина Галина Демьяновна

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Ланин Сергей Николаевич доктор химических наук, вед н с. Тимербаев Андрей Роландович

Ведущая организация.

Институт химии растворов РАН (г. Иваново)

Защита состоится 1 марта 2006 г. в 16 часов 15 минут в ауд. 344 на заседании диссертационного Совета Д 501.001 88 по химическим наукам при Московском государственном университете им M В Ломоносова по адресу 119992, Москва, Ленинские горы, МГУ, химический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке химического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова.

Автореферат разослан «-50» января 2006г.

Ученый секретарь диссертационного Совета,

кандидат химических наук Торочешникова И.И

и

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В работе исследовано влияние водорастворимых порфиринов и фталоцианинов на селективность разделения в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе. При постановке работы мы учитывали, что ВЭЖХ и КЭ дополняют друг друга, используются практически в одних и тех же областях науки и техники и для повышения селективности хроматографического и элекгрофоретического разделения применяются аналогичные приемы. Перспективно получение простыми методами новых адсорбентов на основе известных матриц для внедрения их в аналитическую практику.

В качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов нами использованы водорастворимые порфирины и фталоцианины, которые сравнительно мало изучены, однако, благодаря уникальности строения молекул способны к взаимодействиям с активными центрами поверхностей, сорбатами, полиэлектролитами, подвижными фазами, их состояние в растворе существенно зависит от рН.

В качестве сорбатов были выбраны, с одной стороны, хорошо изученные фенолы, как для уточнения механизма их сорбции на модифицированных сорбентах, так и для тестирования колонок; с другой стороны -водорастворимые витамины, проблема определения которых в обьектах все еще актуальна ввиду сложности, недостаточной экспрессности и селективности существующих методик. Данных по удерживанию водорастворимых витаминов на модифицированных порфиринами и фталоцианинами колонках в литературе нет. Нет данных также по электрофоретическому поведению витаминов в кварцевых капиллярах при использовании рабочих буферных растворов, содержащих эти модификаторы

Цепь работы: исследование селективности хроматографического и электрофоретического разделения, на примере фенолов и водорастворимых витаминов, при использовании порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов.

В постановке задач и обсуждении результатов диссертационной работы активное участие принимал доктор химических наук, профессор Шпигун О .А.

Конкретные задачи исследования:

• изучить адсорбцию модификаторов в статических и динамических условиях, оценить устойчивость модифицированных сорбентов в условиях

вэжх

• рассмотреть механизмы закрепления модификаторов на поверхности сорбентов

• спектроскопически исследовать взаимодействия модификаторов с полиэлектролитом и водорастворимыми витаминами в растворах и на поверхности сорбента для интерпретации экспериментальных данных

• разработать методики получения модифицированных сорбентов за счет физической адсорбции

• сравнить селективность разделения сорбатов на модифицированных и немодифицированных колонках

• оценить воспроизводимость коэффициентов емкости на модифицированных колонках

• оценить селективность разделения витаминов в динамически модифицированных кварцевых капиллярах

Научная новизна. Получены новые адсорбенты путем физической иммобилизации порфиринов и фталоцианинов на сорбентах на основе различных матриц. Модифицировали ЭЛавогЬ-С^, □¡аэрИег-1 Ю-С18, 01аБогЬ-130-С!, 0!авогЬ -130-С4, КазогЬ -130-С1в, БрЬегоп 100 (1.С), ЗрИегоп С 1000, НЕМА в 1000 (ЗЦ №с1ео8Н вВ в статических и динамических условиях. Адсорбцию проводили в присутствии полиэлектролита хлорида полидиаллилдиметиламмония В условиях ВЭЖХ на модифицированных сорбентах исследовано поведение ряда водорастворимых фенолов и витаминов. Данные по хроматографическому удерживанию сорбатов на ЭрИегоп С 1000 и 01азрЬег-110-С1в обработаны согласно моделям Скотта-Кучеры, Снайдера-Сочевинского. Рассчитаны изотермы адсорбции ряда витаминов из данных ВЭЖХ Предложена теоретическая интерпретация полученных результатов, рассмотрены возможные механизмы удерживания модификаторов на сорбентах и сорбатов на модифицированных сорбентах.

Водорастворимые порфирины и фталоцианины предложены в качестве модификаторов для динамического модифицирования капилляра в капиллярном зонном электрофорезе. Исследована зависимость скорости и направления электроосмотического потока, электрофоретической

подвижности, селективности и эффективности разделения водорастворимых витаминов от природы и количества модификатора.

В динамически модифицированном капилляре показана возможность селективного разделения никотинамида и цианокобаламина, увеличение чувствительности определения цианокобаламина. В капиллярном зонном электрофорезе названные витамины не разделяются

Практическая значимость. Предложены простые методики получения новых адсорбентов на основе известных матриц. Представлены примеры разделения модельных смесей замещенных фенолов и водорастворимых витаминов. Возможно разделение пяти витаминов за 20 мин в изократическом режиме на модифицированных N0016081! БВ и шести витаминов за 15 мин на □¡азрЬег-110-С18. Выполнено разделение смеси никотинамида и цианокобаламина методом КЗЭ в присутствии модификаторов. Проанализированы фармацевтические препараты, содержащие водорастворимые витамины, на модифицированных сорбентах в условиях ВЭЖХ и в динамически модифицированных капиллярах методом КЗЭ. В препарате «Пентовит» определен витамин В12.

На защиту выносятся:

• Результаты исследования адсорбции окга-4,5-карбоксифтапоцианата цинка (гпРс) и 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX (Н2ОР) в статических и динамических условиях, устойчивости модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ и механизмов закрепления модификаторов на поверхности сорбентов.

• Результаты спектроскопического исследования взаимодействия модификаторов с полиэлектролитом хлоридом полидиаллилдиметиламмония (ПДА) и водорастворимыми витаминами в растворах и на поверхности сорбента.

• Данные по изучению адсорбции водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ, расчету изотерм адсорбции и термодинамических параметров адсорбции.

• Выводы о применимости моделей Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского к описанию удерживания фенолов на модифицированных 01аврИег-110-С18 и БрЬегоп С 1000.

• Данные по разделению сорбатов на модифицированных и немодифицированных колонках, а также в динамически

модифицированных окта-4,5-фталоцианином (Н2Рс), дигидрохлоридом гематопорфирина (HP), 3,8-ди(1-метоксиэтип)дейтеропорфирином IX кварцевых капиллярах.

• Условия и результаты количественного определения водорастворимых витаминов в фармацевтических препаратах методами ВЭЖХ и КЗЭ

• Выводы о селективности хроматографического и электрофоретического разделения фенолов и водорастворимых витаминов при использовании порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов

Апробация работы. Результаты работы доложены на международных конференциях «Ломоносов-2003», «Ломоносов-2004», «Ломоносов-2005» (Москва, 2003, 2004, 2005), «100 years of chromatography» (Moscow, Russia, 2003), IX Международной конференции по химии порфиринов и их аналогов, (Суздаль, Россия, 2003), всероссийских конференциях «Аналитика России» (Клязьма, 2004), VI Школа-конференция молодых ученых стран СНГ по химии порфиринов и родственных соединений (Санкт-Петербург, 2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и 7 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырех глав экспериментальной части, общих выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Материал диссертации изложен на 156 страницах машинописного текста, содержит 43 рисунка и 28 таблиц, в списке цитируемой литературы 112 наименований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Обзор литературы

Обзор литературы посвящен применению порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз для высокоэффективной жидкостной хроматографии и модификаторов внутренней поверхности капилляра в капиллярном электрофорезе. Так же в обзор литературы включен раздел по определению водорастворимых витаминов методами ВЭЖХ и КЭ. На основе литературных данных обоснованы и конкретизированы задачи диссертационной работы.

Исходные вещества, сорбенты, аппаратура

В качестве модификаторов использовали окга-4,5-карбоксифталоцианин и его комплекс с цинком, синтезированные в Ивановском государственном химико-технологическом университете; 3,8-ди(1-метоксиэтил)

дейтеропорфирин IX, гематопорфирин дигидрохлорид, гемин, синтезированные на кафедре биохимии Московской государственной академии тонкой химической технологии. Индивидуальность соединений подтверждена данными элементного анализа, ВЭЖХ и ИК спектроскопии. Использовали полиэлектролит - хлорид полидиаллилдиметиламмония «Sigma» (Германия).

Для модифицирования использовали гидрофобные носители для ВЭЖХ -Silasorb-C18, Diasorb-130-Ci С4, C16, Diaspher-110-Ci8> все «БиоХимМак» (Россия), а также ионообменники низкой емкости на основе полиметакрилата - Spheron С 100 (LC), Spheron С 1000, «Lachema» (Чехословакия); НЕМА S 1000 QL «Tessek» (Чехословакия) и силикагеля - Nucleosil SB «Harchercy-Nagel» (Германия).

Хроматографическое поведение соединений исследовали в системе ВЭЖХ, состоящей из насоса «Марафон» (Россия), спектрофотометрического детектора «Biotronik ВТ-8200» (Германия), стальной колонки 100x4мм, упакованной вышеперечисленными сорбентами. Объем пробы 20 мкл, длина волны детектирования 254, 280 нм, чувствительность 0,04, расход подвижной фазы составлял 0,3 -1 мл/мин. Мертвое время определяли по удерживанию несорбируемых компонентов: 45-60 с. Использовали также микроколоночный жидкостной хроматограф Милихром-4 с колонкой из нержавеющей стали 80x2мм, заполненной сорбентом Diaspher-110-C18 (масса сорбента 0,125 г), модифицированным окта-4,5-карбоксифталоцианатом цинка в присутствии полиэлектролита ПДА. Расход подвижной фазы составлял 200 мкл/мин, объём пробы 5-10 мкп. Скорость движения диаграммной ленты самописца 0,3-3 см/мин. Детектирование проводили при А=204 или 254 нм. Чувствительность детектора 5 мВ/см. Мертвый объем 145 мкл.

Электрофоретическое поведение соединений изучали в электрофоретической системе «Капель 103Р», «Капель 105Р» фирмы «Люмэкс» (Россия). Пробу вводили под давлением 30 мбар, время ввода 5 с. Длина волны детектирования 210, 254, 360 нм. Скорость электроосмотического потока определяли по времени миграции вещества, нейтрального в условиях КЗЭ - ацетону. Анализ проводили при напряжении 15 кВ. Общая длина кварцевого капилляра 60 см, эффективная - 50 см,

диаметр - 75 мкм. Каждый опыт проводили не мене трех раз. Запись и обработку элекгрофореграмм проводили при помощи компьютерной программы «Мультихром» (версия 1.5).

ЭСП измеряли на спектрофотометре «Shimadzu 2201» (Япония), спектры ДО - на «Спекгротоне» (Узбекистан) pH растворов контролировали универсальным рН-метром со стеклянным электродом "АНИОН" ИПП «Инфраспак-Аналит» (Россия) Взвешивали на аналитических весах AG-204 Deta Range фирмы «Mattler Toledo».

Гетерогенизация порфиринов и фталоцианинов на сорбентах для высокоэффективной жидкостной хроматографии

Одним из способов гетерогенизации порфириновых и фталоцианиновых комплексов является адсорбция из растворов. Адсорбцию модификаторов изучали в статических и динамических условиях на сорбентах различной природы для обращено-фазовой и ионообменной ВЭЖХ.

На гидрофобизированных силикагелях модификатор ZnPc не адсорбируется. Аналогично ведет себя и полиэлектролит - хлорид полидиаплилдиметиламмония. В присутствии полиэлектролита сорбция модификатора не превышает 20% Наиболее подходят для иммобилизации модификатора сорбенты марки Диасорб (рис. 1). Адсорбция фталоцианата из водно-диметилформамидных растворов в присутствии ПДА увеличивается на 5-8% по сравнению с таковой из водных растворов (рис. 2). Для сорбентов марки Диасорб-С4 и -С16 наибольшая адсорбция из водных растворов отмечена при мольном соотношении ZnPc и ПДА 1:2 (рис. 3).

»V20,

15

■ю

5

о

Diasoib Diasoib Diasofb Silasorb

CI C4 C16 CI8

Сопбентм

Рис. 1. Величина адсорбции ZnPc в присутствии ПДА на сорбентах разных марок. Л max, нм: 360 (1), 620 (2), 690 (3).

Я 0.95 ,

0,9 -) 0.85 0,8 0,75

0,7

380 480 580 680

Длина вшвш, ■

Рис. 2. Спектры ДО адсорбатов гпРс из водного раствора ПДА на 01а&огЬ-С1в (1, 2), на ЗИавогЬ-С« (3, 4), в присутствии 20% ДМФА (2, 4).

о,в -

зво

немодифицированный сорбент

480

580 680 780

длит волны, им

Рис. 3. Спектры ДО гпРс 1х10"5 М из водного раствора на ИаэогЬ -С4(1) и -С16 (2) в присутствии ПДА; мольное отношение ПДА£пРс = 2.

Исследование спектров ДО позволило сделать вывод о способе закрепления модификатора на сорбенте и его распределении в хроматографической колонке. Известно, что химическая адсорбция модификаторов на поверхности сорбентов сопровождается заметными спектральными изменениями, а именно появлением новых полос в спектре ДО и смещением максимума при 690 нм в коротковолновую область. Отсутствие подобных спектральных изменений подтверждает физический характер адсорбции. Сопоставление спектров ДО адсорбатов 1пРс (рис. 4) показывает, что адсорбция в динамических условиях больше, чем в статических, однако приводит к неравномерному заполнению поверхности модификатором.

0,00 -I--1-т- ---—

380 460 540 620 700

Длинш волны, нм

Рис. 4. Спектры ДО адсорбатов ZnPc на Silasorb-C18, полученные в статических (1,2) и динамических (3,4) условиях в присутствии ДМФА (2), в нижней (3) и верхней (4) частях колонки.

Наличие в молекуле ZnPc гидрофильных карбоксильных групп обусловливает адсорбцию соединения на поверхности слабокислотных катионообменников. Наибольшая адсорбция модификатора (%) отмечена на Spheron С 1000 после предварительной обработки его раствором полиэлектролита:

Сорбент Адсорбция

в отсутствие ПДА в присутствии ПДА после обработки ПДА

Spheron 100 (LC) 18,8 9,7 57,1

Spheron С 1000 57 45,1 84

Последнее возможно связано с образованием ассоциата на поверхности сорбента по механизму ионного обмена:

R-COOH + R-CI = [R-COOR*]Cr + Н+ Модификаторы ZnPc и H2DP на анионообменниках НЕМА S 1000 QL и Nucleosil SB адсорбируются за счет электростатических и частично гидрофобных взаимодействий в отсутствие полиэлектролита. Зависимость количества модификатора на поверхности НЕМА S 1000 QL от его концентрации в растворе прямолинейна. Это и отсутствие плато позволяет предположить мономолекулярный характер заполнения поверхности модификатором.

Для выяснения механизма адсорбции и удерживания модификатора спектрофотометрическим методом изучено поведение модификаторов в растворе в присутствии полиэлектролита. Показано, что при мольном соотношении ZnPc и ПДА равном 1:2 между формами мономер^димер наступает равновесие. При этом соотношении реагентов наблюдается наибольшая адсорбция ZnPc из раствора в присутствии полиэлектролита.

На основании экспериментальных данных рассчитано количество модификатора на поверхности сорбентов. Оно составляет от 0,075 до 1,2 мкмоль/г. Разработаны методики получения модифицированных сорбентов в статических и динамических условиях.

Сравнение спектров ДО адсорбатов модификаторов до и после работы в условиях ВЭЖХ в различных подвижных фазах доказывает стабильность полученного покрытия и подтверждает возможность использования полученных сорбентов в условиях ВЭЖХ.

Модифицированные сорбенты как неподвижные фазы в ВЭЖХ

Хроматографическое поведение фенолов изучали на сорбентах разной гидрофобности, модифицированных ZnPc в динамических (Silasorb-C18, Díaspher-110-Cie) и статических (Diasorb-C*) условиях. Порядок элюирования фенолов и соответствует увеличению их гидрофобности:

Silasorb-C1B - ZnPc оМН2-<резорцин<фенол<п-Ы02-

Diaspher-110-C1B-ZnPc резорцин < 5-NO2-2-NH2- < n-NOjr < o-CI- < м-CI-

Diasorb-C4- ZnPc резорцин<фенол<5-М02-2-ЫН2<п-М02-<п-С1-

Получены хроматограммы модельной смеси 5 фенолов на модифицированных сорбентах (рис. 5). Порядок выхода фенолов на модифицированном и немодифицированном БрЬегоп С 1000 практически не изменяется:

ЭрЛе/ол С1000 резорцин< фенол< о-С1-< п-ЫОг< 2-МНг5-МО;г- < п-С1- < м-С1-

БрЬегоп С 1000, модифицированный в статических условиях п-ЫО2-< резорцин< фенол< о-С1-<2-ЫНг^Оу-< м-С1-< п-С1-

1

Рис. 5. Хроматограмма модельной смеси

фенолов: резорцин (1), 2-амино-5-нитрофенол (2), п-нитрофенол (3), о-хлорфенол (4), м-хлорфенол (5); ПФ: АН (32%) - Н3Р04 (0,1%) -ЫаС1 (0,1М), рН 2,66; А 280 нм.

На модифицированном ЭрИегоп С 1000 возрастает время удерживания соединений, что подтверждает наличие взаимодействий модификатор -сорбат (рис. 6).

Для выяснения механизма удерживания фенолов на модифицированном вр11егоп С 1000 и 0'1а8рЬег-110-С18 из водно-ацетонитрильных подвижных фаз была оценена возможность описания экспериментальных данных уравнениями Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского (рис. 7, 8). Как видно, вытеснительные модели адекватно описывают экспериментальные данные в ограниченной области концентраций АН. Отклонения от линейности в области как малых, так и больших концентраций АН в элюенте связано с наличием межмолекулярных взаимодействий в ПФ и анионообменного взаимодействия с сорбентом. Отметим также, что наибольшее удерживание фенолов наблюдается при малых концентрациях АН, что согласуется с литературными данными.

Рис. 6. Коэффициенты емкости фенола и его производных на врИегоп С 1000 немодифицированном (1) и модифицированном 2!пРс в статических (2) и динамических условиях (3); ПФ: АН (32%)-Н20; А 280 нм.

Рис 7. Зависимость обратной величины коэффициента емкости от мольной доли ацетонитрила в подвижной фазе на СгаврИег-ИО-С^.

1,6

и

0.8

0.4

4|М

Рис. 8. Зависимость логарифма коэффициента емкости от логарифма мольной доли ацетонитрила в подвижной фазе на ОгаврйеМ 10-С1В.

На НЕМА 8 1000 01, модифицированном в статических условиях, в оптимальных условиях получена хроматограмма модельной смеси 8 фенолов (рис. 9). Селективность исследуемых сорбентов зависит от наличия модификатора и способа получения модифицированного сорбента. Но это не влияет на порядок выхода соединений.

Получены следующие ряды удерживания витаминов на модифицированных анионообменниках в боратном и фосфатном буферном растворах:

Рис. 9. Хроматограмма модельной смеси фенолов: о-аминофенол (1), резорцин (2), фенол (3), о-хлорфенол (4), 2-ЗМИНО-5-нитрофенол(б), п-нитрофенол (6), м-хлорфенол(7), п-хлорфенол (8) на колонке НЕМА Б 1000 01, модифицированной ТпРс в статических условиях; ПФ: АН (8%)-боратный буферный раствор (50 мМ), рН 10,0; Л 280 нм.

0 4 8 12 16 30 24

НЕМА в 1000-

модификатор (мкмоль/г)

боратный буферный раствор, рН 9,18

Н2ОР (0,65)

В12<В15НА5В6<С5НК<В2

Н2ОР(1,3)

В12<В1 5 НА 5 Вв* С £ НК < Вг

гпРс(0,65)

В12< НА<С < Ве< НК< В2

Л/ис/еов// вв, ПФ- АН (8%) - фосфатный буферный раствор (рН 6,86)-

В, 5 В« 5 Ве £ НА <С < Вг < РР Селективность и порядок выхода витаминов в данных условиях зависят от используемого модификатора, природы неподвижной фазы и состава элюента. При увеличении количества модификатора на НЕМА в 1000 порядок выхода не изменяется, но время удерживания всех исследуемых витаминов уменьшается. Это может быть связано с экранированием гидрофобными участками молекул модификатора групп четвертичного аммониевого основания на поверхности сорбента. В оптимальных условиях получены хроматогаммы модельных смесей витаминов на сорбентах, модифицированных гпРс. На модифицированной колонке НЕМА в 1000 01 возможно разделение шести витаминов до базовой линии при скорости элюента 0,3 мл/мин (рис. 10). Время выхода Вг при этом составляет 1час 40 мин, на хроматограмме не показан. На модифицированном □¡аэрИег-ИО-С^ удалось разделить шесть витаминов в течение 15 минут (рис. 11). Согласно литературным данным, чаще всего удается разделение смесей, состоящих из 3-5 водорастворимых витаминов за 20-40 мин в градиентном режиме или в условиях ион-парной ВЭЖХ. Поэтому наша методика определения витаминов не уступает, а ряде случаев и превосходит по селективности, эффективности и экспрессносги известные из литературы методики разделения и определения водорастворимых витаминов.

Для интерпретации результатов были измерены ЭСП сорбатов в отсутствие и присутствии модификаторов, подтверждены взаимодействия мееду ними, а также рассчитаны изотермы адсорбции витаминов по данным ВЭЖХ методом Глюкауфа (рис. 12). Рассчитаны оценочные величины термодинамических параметров, характеризующих процесс адсорбции:

Витамин Емкость монослоя а„, 10е, моль/г Константа адсорбции К-10"3, л/моль * "»' гыМСпипПС ИИ Гиббса адсорбции АС, кДж/моль

С 18,5 0,05 -9,5

Вз 3,6 0,73 -16,1

Вв 4,3 1,64 -18,0

НА 2,5 4,10 -20,2

Рис. 10. Хроматограмма Рис. 11. Хроматограмма модельной

модельной смеси витаминов на смеси витаминов на О'шврЬег-ИО-С« -

НЕМА Б 1000 01 - гпРс; Г!Ф: гпРс; ПФ: фосфатный буферный раствор

боратный буферный раствор (10 (10 мМ), рН 6,86; Л 204 нм. мМ), рН 9,18; V элюента: 0,3 мл/мин.

Рис. 12. Изотермы адсорбции витаминов (Т = 20°С); ПФ: 10 мМ фосфатный буфер, рН 6,86; А 204 нм.

Форма изотермы адсорбции дает качественную информацию о природе взаимодействия растворенное вещество - поверхность. Таким образом, анализ изотерм адсорбции позволяет получить полезную информацию о механизме адсорбции некоторых водорастворимых витаминов. Экспериментальные данные подтвердили перспективность использования модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ.

Порфирины и фталоцианины как модификаторы в капиллярном зонном электрофорезе

При выборе условий электрофоретического разделения водорастворимых витаминов и интерпретации результатов мы учитывали заряд внутренней поверхности кварцевого капилляра до и после динамического модифицирования; направление и скорость электроосмотического потока, а также состояние водорастворимых витаминов в растворе в зависимости от рН и их взаимодействия с модификаторами.

В начале работы были выбраны оптимальные условия определения и разделения водорастворимых витаминов в КЗЭ в отсутствие модификатора. Известно, что электроосмотический поток в кварцевых капиллярах зависит от рН и концентрации раствора электролита. Оптимальным для разделения стандартной смеси витаминов оказался рН 9,18 (боратный буферный раствор) (рис. 13). Все витамины, кроме НА и В12. при этом рН электролита разделяются в соответствии с величинами своей электрофоретической подвижности. В этих условиях витамин В1 заряжен положительно и движется в одном направлении с ЭОП, поэтому время его выхода из капилляра мало по сравнению с остальными витаминами, он детектируется до системного пика. Витамин В12 и НА незаряжены, выходят одним пиком за счет слабых межмолекулярных взаимодействий, их переносит электроосмотический поток. Остальные витамины, существующие в виде анионов, перемещаются к катоду медленнее ЭОП.

Для определения оптимальной концентрации боратного буферного раствора были проанализированы стандартные смеси витаминов в диапазоне его концентраций 5 - 30 мМ (рис. 14). Для дальнейшей работы был выбран буферный раствор с концентрацией 10 мМ, разделение в котором прошло достаточно селективно и быстро. Далее были выбраны порфирины и фталоцианины для модифицирования буферного раствора.

Рис 13 Электрофореграмма смеси 8 водорастворимых витаминов; 10 мМ боратный буферный раствор (рН 9,18); А 254 нм.

Рис. 14. Зависимость ^ водорастворимых витаминов от концентрации боратного буферного раствора (рН 9,18).

ито происходит при введении модификатора? Отметим, что модификаторы существуют в щелочной среде в виде анионов, поэтому практически не взаимодействуют с отрицательно заряженной поверхностью кварцевого капилляра, т.е. формирование узких зон витаминов в КЗЭ происходит непосредственно в среде электролита без взаимодействий с внутренней поверхностью капилляра. Направление ЭОП сохраняется. Скорость его в присутствии модификаторов различной природы изменяется неоднозначно. При использовании дигидрохлорида гематопорфирин, 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX, окта-4,5-карбоксифталоцианина возможно селективное разделение смеси из восьми витаминов, в том числе В12 и никотинамида (рис.15). Порядок выхода витаминов в присутствии модификаторов различной природы практически не изменяется и соответствует величине заряда и радиусу ионов. Наибольшая чувствительность определения В12 отмечена в присутствии дигидрохлорида гематопорфирина при 360 нм (рис. 16).

При динамическом модифицировании капилляра селективному разделению витамина В12 и никотинамида, вероятно, способствует конкурирующий процесс образования межмолекулярного ассоциата никотинамида и модификатора посредством водородных связей между амидной фуппой никотинамида и заместителями в порфириновом кольце модификатора. Это подтверждается увеличением интенсивности и сдвигом полосы Соре в электронном спектре поглощения модификатора.

Рис. 15. Электрофореграмма смеси водорастворимых витаминов; 10 мМ боратный буферный раствор (рН 9,18) - Н2ОР (9x10"4 М), А 254 нм.

250 Н

200

100

150

50

О

"1254

■ 2Н

■ за

нет Н2Рс НР Н2РР

ИЩМфОИОР

Рис. 16. Зависимость площади пика В12от вида модификатора и длины волны детектирования.

В условиях ВЭЖХ и капиллярного зонного электрофореза в присутствии модификаторов порфиринов и фталоцианинов были проанализированы фармацевтические препараты. Полученные результаты согласуются с паспортными данными анализируемых образцов.

Можно предположить, что в ВЭЖХ и КЗЭ на селективность разделения сорбатов влияют взаимодействия одних и тех же типов: гидрофобные (для соединений, содержащих ароматические системы), электростатические (между положительно заряженным атомом металла в порфирине и анионами витаминов) и аксиальная координация безметальных модификаторов центральным атомом металла витамина (например, цианокобапамина) и др. Также свой вклад в удерживание и электрофоретическую подвижность разделяемых соединений вносит образование водородных связей между аминофуппами витаминов и пиррольными атомами азота молекулы порфирина.

1. Методом ДО подтвержден физический характер адсорбции модификаторов окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка и 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX в присутствии полиэлектролита

Выводы

хлорида полидиаллилдиметиламмония на сорбентах для обращено-фазовой и ионообменной ВЭЖХ - вНаэогЬ-С^, □¡абрЬег-110-С18, С)|'аБОгЬ-130-С,, 0'1авогЬ-130-С4, 0'|а80гЬ-130-С16, БрЬегоп 100 (1С), ЭрИегоп С 1000, НЕМА Э 1000 <21-, Ыис1ео8Н ЭВ. Предложены методики получения модифицированных сорбентов. Показана устойчивость модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ.

2. Спектрофотометрическим методом исследовано состояние окта-4,5-карбоксифтапоцианата цинка в растворе в присутствии полиэлектролитов. Предложены механизмы адсорбции окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка на гидрофобизированных силикагелях и катионообменниках на основе полиметакрилатной матрицы в присутствии полиэлектролита; 3,8-ди(1-метоксиэтил) дейтеропорфирина IX на анионообенниках на основе силикагеля и полиметакрилатной матрицы.

3. Найдены условия разделения семи фенолов на модифицированном НЕМА в 1000 01. и пяти фенолов на модифицированном □¡а8рИег-110-С18 Порядок выхода фенолов соответствует увеличению их гидрофобности. Вытеснительные модели Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского для 01а$рЬег-110-С18 адекватно описывают экспериментальные данные в диапазоне 8 - 70 % полярной добавки подвижной фазы, для ЗрИегоп С 1000 в диапазоне 8 - 50%.

4. Найдены условия для разделения стандартной смеси 6 водорастворимых витаминов на модифицированном 01а8рНег-110-С1в в течение 15 мин и 5 витаминов на Ыис1еовП ЭВ в течение 20 мин. Рассчитаны их изотермы адсорбции по методу Глюкауфа и некоторые термодинамические параметры адсорбции (ат, К, Дв). Построены шкалы селективности.

5 Установлено, что для динамического модифицирования капилляра наиболее подходят оюа-4,5-карбоксифталоцианин, 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирин IX, дигидрохлорид гематопорфирина Показано увеличение селективности разделения витаминов НА и В12 и чувствительности определения В12 в присутствии модификаторов в буферном растворе.

6 Найдены условия для разделения и количественного определения водорастворимых витаминов в условиях ВЭЖХ и КЗЭ в присутствии окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка, 3,8-ди(1-метоксиэтил) дейтеропорфирина IX и дигидрохлорида гематопорфирина. Проанализированы фармацевтические препараты. Полученные

результаты согласуются с паспортными данными анализируемых образцов.

7. Спектроскопически подтверждены взаимодействия в системе модификатор - витамин в растворе и на поверхности сорбента. Данные использованы при интерпретации удерживания витаминов в колонках и электрофоретического поведения в динамически модифицированном капилляре.

8. Анализ экспериментальных данных показал, что на селективность разделения сорбатов в ВЭЖХ и КЗЭ влияют взаимодействия одних и тех же типов.

Основные результаты работы изложены в следующих публикациях:

1. Жарикова B.C., Матусова С. М., Лобанова Т.М., Нестерова О.В. ВЭЖХ геминпептидов на неподвижной фазе с иммобилизованным окта-4,5-карбоксифтапоцианатом цинка. / Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2003» (секция химия). Москва. 2003. 15-18 апреля. С. 18.

2. Zharikova V.S., Matusova S.M., Brykina G.D., Pirogov A.V., Shpigun O.A., Zheltukhina G A. HPLC of the peptide derivatives of protohemine IX / Proceedings of the 3rd International Symposium on Separation in Biosciences -SBS 2003 «100 years of chromatography». Moscow. Russia. 2003. May 13-18. Moscow. 2003. P. 29.

3. Жарикова B.C., Матусова С. M., Брыкина Г.Д., Пирогов А В., Шпигун O.A., Желтухина Г.А. Исследование и использование в ВЭЖХ комплексов водорастворимых фталоцианинов с полиэлектролитами. / Материалы IX Международной конференции по химии порфиринов и их аналогов. Суздаль. 2003. 8-12 сентября. С. 255.

4. Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Пирогов A.B., Шпигун O.A. // Адсорбция окта-4, 5-карбоксифталоцианата цинка в присутствии полиэлектролита на сорбентах для ВЭЖХ. Вестн. МГУ. Сер.2. Химия. 2003. 44. №6. С.409-411.

5. Жарикова B.C., Матусова С.М. Spheron-СЮОО, модифицированный фталоцианинами, как неподвижная фаза в ВЭЖХ. / Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2004» (секция химия). Москва. 2004. 12-15 апреля. С. 12.

6. Жарикова B.C., Брыкина Г.Д., Пирогов A.B., Шпигун O.A., Павлов В.Ю. Разделение витаминов методом КЗЭ с использованием капилляра,

модифицированного производными порфирина. / Материалы Всероссийской конференции «Аналитика России», посвященной 100-летию со дня рождения академика И. П. Алимарина. Клязьма. 2004. 27 сентября-1 октября. С. 185.

7. Мочалова В С., Брыкина Г.Д., Минаева Л.И., Матусова С.М., Павлов В Ю., Рожманова Н.Б., Шпигун O.A. Водорастворимые порфирины как модификаторы в КЗЭ. VI Школы-конференции молодых ученых стран СНГ по химии порфиринов и родственных соединений. Санкт-Петербург 2005. 17-23 января. С. 125 8 Мочалова В С , Матусова С. М. Поведение водорастворимых витаминов на колонках, модифицированных порфиринами и фталоцианинами. I Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2005» (секция химия). Москва. 2005.12-15 апреля. С. 29 9. Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Матусова С M, Шпигун O.A. Хроматографические свойства сорбентов для ВЭЖХ, модифицированных окта-4,5-карбоксифталоцианатом цинка. II Журн. аналит химии. 2005 Т 60. №11. С 1170-1175 10 Мочалова В С , Брыкина Г.Д , Шпигун OA// ВЭЖХ водорастворимых витаминов на модифицированных сорбентах. Вестн МГУ. Сер 2 Химия 2006. Т.47. N8 3. С.140-Й5,

АМГ

»-2 945

Подписано к печати 24 01.06 Тираж 100 экз. Заказ № 12 Отпечатано в ООП МГУ

 
Содержание диссертации автор исследовательской работы: кандидата химических наук, Мочалова, Вера Сергеевна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Порфирины и фталоцианины как модификаторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе.

1.2. Определение водорастворимых витаминов методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярного электрофореза.

Глава 2. Исходные вещества, подвижные фазы, рабочие буферные растворы, сорбенты, методика работы, аппаратура, расчетные формулы.

Глава 3. Гетерогенизация порфиринов и фталоцианинов на сорбентах для высокоэффективной жидкостной хроматографии

3.1. Адсорбция из растворов на гидрофобизированных силикагелях и ионообменниках низкой емкости.

3.2. О механизмах адсорбции модификаторов.

Глава 4. Модифицированные сорбенты как неподвижные фазы в ВЭЖХ

4.1. Удерживание фенолов на гидрофобизированных силикагелях и ионообменниках на основе полиметакрилатной матрицы.

4.2. Поведение водорастворимых витаминов на ионообменниках на основе силикагеля и полиметакрилатных матриц.

4.3. Анализ фармацевтических препаратов.

Глава 5. Порфирины и фталоцианины как модификаторы в КЗЭ

5.1. Выбор оптимальных условий разделения водорастворимых витаминов (рН, концентрация буферного раствора).

5.2. Поведение витаминов в динамически модифицированном кварцевом капилляре.

5.3. Анализ фармацевтических препаратов.

ВЫВОДЫ.

 
Введение диссертация по химии, на тему "Водорастворимые порфирины и фталоцианины как модификаторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе"

Актуальность темы. В работе исследовано влияние водорастворимых порфиринов и фталоцианинов на селективность разделения в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе. При постановке работы мы учитывали, что ВЭЖХ и КЭ дополняют друг друга, используются практически в одних и тех же областях науки и техники и для повышения селективности хроматографического и электрофоретического разделения применяются аналогичные приемы. Перспективно получение простыми методами новых адсорбентов на основе известных матриц для внедрения их в аналитическую практику.

В качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов нами использованы водорастворимые порфирины и фталоцианины, которые сравнительно мало изучены, однако, благодаря уникальности строения молекул способны к взаимодействиям с активными центрами поверхностей, сорбатами, полиэлектролитами, подвижными фазами, их состояние в растворе существенно зависит от рН.

В качестве сорбатов были выбраны, с одной стороны, хорошо изученные фенолы, как для уточнения механизма их сорбции на модифицированных сорбентах, так и для тестирования колонок; с другой стороны - водорастворимые витамины, проблема определения которых в объектах все еще актуальна ввиду сложности, недостаточной экспрессности и селективности существующих методик. Данных по удерживанию водорастворимых витаминов на модифицированных порфиринами и фталоцианинами колонках в литературе нет. Нет данных также по электрофоретическому поведению витаминов в кварцевых капиллярах при использовании рабочих буферных растворов, содержащих эти модификаторы.

Цель работы: исследование селективности хроматографического и электрофоретического разделения, на примере фенолов и водорастворимых витаминов, при использовании порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов.

Конкретные задачи исследования:

• изучить адсорбцию модификаторов в статических и динамических условиях, оценить устойчивость модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ

• рассмотреть механизмы закрепления модификаторов на поверхности сорбентов

• спектроскопически исследовать взаимодействия модификаторов с полиэлектролитом и водорастворимыми витаминами в растворах и на поверхности сорбента для интерпретации экспериментальных данных разработать методики получения модифицированных сорбентов за счет физической адсорбции

• сравнить селективность разделения сорбатов на модифицированных и немодифицированных колонках

• оценить воспроизводимость коэффициентов емкости на модифицированных колонках

• оценить селективность разделения витаминов в динамически модифицированных кварцевых капиллярах

Научная новизна. Получены новые адсорбенты путем физической иммобилизации порфиринов и фталоцианинов на сорбентах на основе различных матриц. Модифицировали Silasorb-Ci8, Diaspher-110-Cig, Diasorb-130-C,, Diasorb -130-C4, Diasorb -130-C,6, Spheron 100 (LC), Spheron С 1000, НЕМА S 1000 QL, Nucleosil SB в статических и динамических условиях. Адсорбцию проводили в присутствии полиэлектролита хлорида полидиаллилдиметиламмония. В условиях

ВЭЖХ на модифицированных сорбентах исследовано поведение ряда водорастворимых фенолов и витаминов. Данные по хроматографическому удерживанию сорбатов на Spheron С 1000 и Diaspher-110-Cis обработаны согласно моделям Скотта-Кучеры, Снайдера-Сочевинского. Рассчитаны изотермы адсорбции ряда витаминов из данных ВЭЖХ. Предложена теоретическая интерпретация полученных результатов, рассмотрены возможные механизмы удерживания модификаторов на сорбентах и сорбатов на модифицированных сорбентах.

Водорастворимые порфирины и фталоцианины предложены в качестве модификаторов для динамического модифицирования капилляра в капиллярном зонном электофорезе. Исследована зависимость скорости и направления электроосмотического потока, электрофоретической подвижности, селективности и эффективности разделения водорастворимых витаминов от природы и количества модификатора.

В динамически модифицированном капилляре показана возможность селективного разделения никотинамида и цианокобаламина, увеличение чувствительности определения цианокобаламина. В классическом капиллярном зонном электрофорезе названные витамины не разделяются.

Практическая значимость. Предложены простые методики получения новых адсорбентов на основе известных матриц. Представлены примеры разделения модельных смесей замещенных фенолов и водорастворимых витаминов. Возможно разделение пяти витаминов за 20 мин в изократическом режиме на модифицированном Nucleosil SB и шести витаминов за 15 мин на Diaspher-110-Cig. Выполнено разделение смеси никотинамида и цианокобаламина методом КЗЭ в присутствии модификаторов. Проанализированы фармацевтические препараты, содержащие водорастворимые витамины, на модифицированных сорбентах в условиях ВЭЖХ и в динамически модифицированных капиллярах методом КЗЭ. В препарате «Пентовит» определен витамин В]2.

На защиту выносятся:

• Результаты исследования адсорбции окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка и 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX в статических и динамических условиях, устойчивости модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ и механизмов закрепления модификаторов на поверхности сорбентов.

• Результаты спектроскопического исследования взаимодействия модификаторов с полиэлектролитом хлоридом полидиаллилдиметиламмония и водорастворимыми витаминами в растворах и на поверхности сорбента.

• Данные по изучению адсорбции водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ, расчету изотерм адсорбции и термодинамических параметров адсорбции.

• Выводы о применимости моделей Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского к описанию удерживания фенолов на Diaspher-1 lO-Cig и Spheron С 1000.

• Данные по разделению сорбатов на модифицированных и немодифицированных колонках, а также в динамически модифицированных окта-4,5-фталоцианином, дигидрохлоридом гематопорфирина, 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирином IX кварцевых капиллярах.

• Условия и результаты количественного определения водорастворимых витаминов в фармацевтических препаратах методами ВЭЖХ и КЗЭ.

• Выводы о селективности хроматографического и электрофоретического разделения фенолов и водорастворимых витаминов при использовании порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов.

Апробация работы. Результаты работы доложены на международных конференциях «Ломоносов-2003», «Ломоносов-2004», «Ломоносов-2005» (Москва, 2003, 2004, 2005), «100 years of chromatography» (Moscow, Russia, 2003), IX Международной конференции по химии порфиринов и их аналогов (Суздаль, Россия,

2003), всероссийских конференциях «Аналитика России» (Клязьма,

2004), VI Школе-конференции молодых ученых стран СНГ по химии порфиринов и родственных соединений (Санкт-Петербург, 2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи:

• Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Пирогов А.В., Шпигун О.А. // Адсорбция окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка в присутствии полиэлектролита на сорбентах для ВЭЖХ. Вестн. МГУ. Сер.2. Химия. 2003. 44. №6. С.409-411.

• Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Матусова С.М., Шпигун О.А. Хроматографические свойства сорбентов для ВЭЖХ, модифицированных окта-4,5-карбоксифталоцианатом цинка. // Журн. аналит. химии. 2005. Т.60. №11. С. 1170-1175.

• Мочалова B.C., Брыкина Г.Д., Шпигун О.А. // ВЭЖХ водорастворимых витаминов на модифицированных сорбентах. Вестн. МГУ. Сер.2. Химия. 2006. Т.47. № 3. С. 180-185 и 7 тезисов докладов.

 
Заключение диссертации по теме "Аналитическая химия"

Выводы

1. Методом ДО подтвержден физический характер адсорбции модификаторов окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка и 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX в присутствии полиэлектролита хлорида полидиаллилдиметиламмония на сорбентах для обращено-фазовой и ионообменной ВЭЖХ - Silasorb-Cis, Diaspher-110-Cis, Diasorb-130-Сь Diasorb- 130-C4, Diasorb-130-Ci6, Spheron 100 (LC), Spheron С 1000, НЕМА S 1000 QL, Nucleosil SB. Предложены методики получения модифицированных сорбентов. Показана устойчивость модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ.

2. Спектрофотометрическим методом исследовано состояние окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка в растворе в присутствии полиэлектролитов. Предложены механизмы адсорбции окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка на гидрофобизированных силикагелях и катионообменниках на основе полиметакрилатной матрицы в присутствии полиэлектролита; 3,8-ди(1-метоксиэтил) дейтеропорфирина IX на анионообенниках на основе силикагеля и полиметакрилатной матрицы.

3. Найдены условия разделения семи фенолов на модифицированном НЕМА S 1000 QL и пяти фенолов на модифицированном Diaspher-110-Ci8. Порядок выхода фенолов соответствует увеличению их гидрофобности. Вытеснительные модели Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского для Diaspher-110-Cis адекватно описывают экспериментальные данные в диапазоне 8 -70 % полярной добавки подвижной фазы, для Spheron С 1000 в диапазоне 8 — 50% .

4. Найдены условия для разделения стандартной смеси 6 водорастворимых витаминов на модифицированном Diaspher-1 lO-Cjg в течение 15 мин и 5 витаминов на Nucleosil SB в течение 20 мин. Рассчитаны их изотермы адсорбции по методу Глюкауфа и некоторые термодинамические параметры адсорбции (ат, К, AG). Построены шкалы селективности.

5. Установлено, что для динамического модифицирования капилляра наиболее подходят окта-4,5-карбоксифталоцианин, 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX, дигидрохлорид гематопорфирин. Показано увеличение селективности разделения витаминов НА и В12 и чувствительности определения Bj2 в присутствии модификаторов в буферном растворе.

6. Найдены условия для разделения и количественного определения водорастворимых витаминов в условиях ВЭЖХ и КЗЭ в присутствии окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка, 3,8-ди(1-метоксиэтил) дейтеропорфирина IX и дигидрохлорида гематопорфирина. Проанализированы фармацевтические препараты. Полученные результаты согласуются с паспортными данными анализируемых образцов.

7. Спектроскопически подтверждены взаимодействия в системе модификатор - витамин в растворе и на поверхности сорбента. Данные использованы при интерпретации удерживания витаминов в колонках и электрофоретического поведения в динамически модифицированном капилляре.

8. Анализ экспериментальных данных показал, что на селективность разделения сорбатов в ВЭЖХ и КЗЭ влияют взаимодействия одних и тех же типов.

 
Список источников диссертации и автореферата по химии, кандидата химических наук, Мочалова, Вера Сергеевна, Москва

1. Уварова М.И., Брыкина Г. Д., Шпигун О.А. Порфирины и фталоцианины в ВЭЖХ (обзор). // Журн. аналит. химии. 2000. Т.55. С.1014-1024.

2. Брыкина Г.Д., Матусова С.М., Шпигун О.А. и др. Обращенно-фазовая ВЭЖХ геминпептидов на сорбенте, модифицированном цинк-окта-4,5-карбоксифталоцианином. // Журн. аналит. химии. 2004. Т.59. С.301-306.

3. Tomankova Z., Matjka P., Sykora D., Krai V. Interaction of oligopyrrole macrocycles with aromatic asids: spectroscopical, quantum chemical and chromatographic aspects. // Talanta. 2003. V.59. P.817-823.

4. Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Пирогов A.B., Шпигун О.А. Адсорбция окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка в присутствии полиэлектролита на сорбентах для высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Вестн. Моск. ун-та. Сер.2. Химия. 2003. Т. 44. С.409-411.

5. Mifune М., Shimonura Y., Saito Y. et al. High-performance liquid chromatography stationary phases based on tl-tl — electron interaction. Aminopropyl silica gels modified with metal phthalocyanines. // Bull. Chem. Soc. Jpn. 1998. V.71. P.1825-1830.

6. Mifune M., Kanai Т., Urabe M. et al. Separation characteristics of aminopropyl silica gels modified with copper-phthalocyanine as high-performance liquid chromatography stationary phases. // Anal. Sci. 1999. V.15. P. 581-587.

7. Kibbey C.E., Meyerhoff M.E. Preparation and characterization of covalently bound tetraphenylporhhyrin-silica gel stationary phases for reversed-phase and anion-exchange chromatography. // Anal. Chem. 1993. V.65. P.2189-2194.

8. Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Матусова C.M., Шпигун O.A. Хроматографические свойства сорбентов для ВЭЖХ, модифицированных окта-4,5-карбоксифталоцианатом цинка. // Журн. аналит. химии. 2005. Т.60. №11. С.1170-1175.

9. Борисенкова С.А., Гиренко Е.Г. Успехи химии порфиринов. Т. 1/ Под ред. О.А. Голубчикова С-Пб: НИИ Химии СпбГУ, 1997. 384 с.

10. Основы аналитической химии. Коллектив авторов. В 2-х кн. Кн. 1. Общие вопросы. Методы разделения. М: Высшая школа, 2004. С. 342.

11. Руководство по капиллярному электрофорезу / Под ред. A.M. Волощука. М.: РАН. 1996.231 с.

12. Бекасова О.Д., Бреховских А.А., Брыкина Г.Д. и др. R-фикоэритрин как природный лиганд для детоксикации ионов кадмия и туннельная матрица для синтеза наночастиц сульфида кадмия. // Прикладная биохимия и микробиология. 2005. Т.41. С. 308-314.

13. Xu D-K., Lin Н., Chen H-Y. Amperometric detection of enzymes in capillary zone electrophoresis based on dynamic modification with surfactants. // Anal. Chim. Acta. 1997. V. 349. P. 215-219.

14. Li W., Zhong Y., Lin В., Su Z. Characterzation of polyethylene glycol-modified proteins by semi-aqueous capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 905. P. 299-307.

15. Fotsing L., Fillet M., Chiap P., Hubert P., Crommen J. Elimination of adsorption effects in the analysis of water-soluble vitamins in pharmaceutical formulations by capillary electrophoresis. // J. Chrom. A. 1999. V. 853. P. 391-401.

16. Beale S.C. Capillary Electrophoresis. // Anal. Chem. 1998. V. 70. P. 279 -300.

17. Britz-Mckibbin P., Chen D. A Water-soluble tetraethylsulfonate derivative of 2-methylresorcinarene as an additive for capillary electrophoresis. //Anal. Chem. 1998. V. 70. P. 907- 912.

18. Bachmann K., Bazzanella A., Haag I., Han K.-Y., Arnecke R., Bohmer V., Vogt W. Resorcarenes as pseudostationary phases with selectivity for electrokinetic chromatography. // Anal. Chem. 1995. V. 67. P. 1722 -1726.

19. Biesaga M., Pyrzynska K., Trojanowicz M. Porphyrins in analytical chemistry. A review. // Talanta. 2000. V. 51. P. 209 224.

20. Charvatova J., Kastfka V., Krai V., Deyl Z. Capillary electrochromatographic study of interactions of porhyrin derivatives with amino acids and oligopeptides. // J. Chromatogr. B. 2002. V. 770. P. 165 -175.

21. Charvatova J., Kasicka V., Deyl Z.} Krai V. Influencing electroosmotic flow and selectivity in open tubular electrochromatoghraphy by tetrakis(pentafluorophenyl)porphyrin as capillary wall modifier // J. Chromatogr. A. 2003. V. 990. P. 111 119.

22. Charvatova J., Matejka P., Krai V., Deyl Z. Open-tubular electrochromatography of organic phosphates on a sapphyrin-modified capillary. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 921. P. 99 107.

23. Charvatova J., Deyl Z., Kasicka V., Krai V. Open-tubular electrochromatography of underivatized amino acids using Rh(III) tetrakis(phenoxyphenyl)porphyrin as capillary wall modifier // J. Chromatogr. A. 2003. V. 990. P. 159 167.

24. Charvatova J., Krai V., Deyl Z. Capillary electrochromatographic separation of aromatic amino acids possessing peptides using porphyrin derivatives as the inner wall modifiers. // J. Chromatogr. B. 2002. V. 770. P. 155-163.

25. Xiao J., Meyerhoff M. Retention behavior of amino acids and peptides on protoporphyrin-silica stationary phases with varying metal ion center. // Anal. Chem. 1996. V. 68. P. 2818 2825.

26. Bushan R, Meenakshi A. Separation of vitamin В complex and folic acid by HPLC normal phase and reversed phase TLC. // Nat. Acad. Sci. Lett. 2002. V.25. P.159. Цит. по РЖХим. 2004, 15Б2.522.

27. Cheong W.J., Ко J.H., Cho C.M. Simultaneous determination of water-soluble vitamins excreted in human urine after overdose of vitamin pills by a HPLC method coupled with a solid phase extaraction. // Talanta. 2000. V.51. P.799-805.

28. Gizawy S.M., Ahmed A.N. High performance liquid chromatographic determination of multivitamin preparation using a chemically bonded cyclodextrin stationary phase. // Anal. Lett. 1991. V.24. P.l 173-1179.

29. Ying L., Phyllis R. The optimization of HPLC-UV conditions for use with FTIR detection in the analysis of В vitamins. // J. Liq. Chromatogr. & Relat. Technol. V. 26. P. 1769. Цит. по РЖХим. 2003,22Г.212.

30. Wongyai S. Determination of vitamin В12 in multivitamin tablets by multimode HPLC. //J. Chromatogr. A. 2000. V.870. P.217-222.

31. Кожанова JI.A., Федорова Г.А., Барам Г.И. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в поливитаминных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. аналит. химии 2002. Т.57. С.49-53.

32. Moreno P., Salvado V. Determination of eight water- and fat-soluble vitamins in multi-vitamin pharmatceutical formulations by high-perfomens liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 2000. V.870. P.207-212.

33. Chan M.C., Joung H.K, Won J.C. Simultaneous dermination of water-soluble vitamins excreted in human urine after eating an ovardose of vitamin pills by a HPLC method coupled with a solid phase extraction. // Talanta. 2000. P.799-806

34. Klejdus В., Petrova J., Potesil D. and oth. Simultaneous dermination of water- and fat-soluble vitamins in pharmatceutical preparations by HPLC coupled with diode array detection. // Anal. Chim. Acta. 2004. V.520. P.57-62.

35. Heudi O., Kilinc Т., Fontannaz P. Separation of water-soluble vitamins by reversed-phase HPLC with UV-detection: Application to polyvitaminated premixes. //J. Chromatogr. A. 2005. V.1070. P.49-54.

36. Vinas P., Lopez-Erroz C., Balsalobre N.,Hernandez-Cordoba M. Reversed-phase liquid chromatography on an amide stationary phase ferthe determination of the В group vitamins in baby foods. // J. Chromatogr. A. 2003. V.1007. P.77-83.

37. Филимонов B.H, Колосова И.Ф., Балятинская Л.Н. Хроматографическое поведение водорастворимых витаминов. // Журн. аналит. химии. 1991. Т.46. С.758-762.

38. Ghorbani A., Momenbeik F., Khorasani J., Simultaneous micellar liquid chromatographic analysis of seven water-soluble vitamins: optimization using super-modified simplex. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. V.379. P.439-443.

39. Староверов B.M., Дейнека В.И., Григорьев A.M. и др. ВЭЖХ-анализ водорастворимых витаминов в составе поливитаминного сиропа «Олиговит». // Хим.-фарм. журн. 2004. Т.38. С.54-60.

40. Рухадзе М.Д., Безарашвили Г.С., Филимонов В.Н. Оптимизация разделения смеси витаминов группы В симплекс-методом в субмицеллярной хроматографии. // Журн. физ. химии 2002. Т.76. С.521-526.

41. Рухадзе М.Д., Безарашвили Г.С., Сидамонидзе Ш.И. Оптимизация хроматографического разделения смеси витаминов группы В симплекс-методом. // Журн. физ. химии 1999. Т.73. С.223 7-2240.

42. Лутцева А.И., Маслов Л.Г. Методы контроля и стандартизации лекарственных препаратов, содержащих водорастворимые витамины. //Хим.-фарм. журн. 1999. Т.ЗЗ. С.30-37.

43. Cao Z., Ding X., Ye J. Determinations of water-soluble vitamins in multivitamin tablets be capillary electrophoresis with electrochemical detection. // Fenxi-Ceshi-Xuebao. 1999. V. 18. P. 57-59.

44. Fotsing L., Fillet M., Chiap P., Hubert P., Crommen J. Elimination of adsorption effects in the analysis of water-soluble vitamins in pharmaceutical formulations by capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 853. P. 391-401.

45. Panak K.C., Giorgieri S.A., Ruiz O.A., Diaz L.E. Postharvest analysis of vitamin С and inorganic cations in lettuce by capillary zone electrophoreses. // J. Cap. Electrophoresis. 1998. V. 5. P. 59-63.

46. Zhang Z., Chen X., Hu Z. Determination of three water-soluble active ingredients in Quangli Yingqiao containing vitamin С tablets by capillary zone electrophoresis. // J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 1997. V. 20. P. 3245-3255.

47. Fotsing L., Fillet M., Bechet I. Determination of six water-soluble vitamins in pharmaceutical formulation by capillary electrophoresis. // J. Pharm. Biomed. Anal. 1997. V. 15. P. 1113-1123.

48. Shiewe J., Mrestani Y. Application and optimization of capillary zone electrophoresis in vitamin analisis. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 717. P. 255-259.

49. Boonkerd S., Detaevernier M. R., Michotte Y. Use of capillary electrophoresis for the determination of vitamins of the В group in pharmaceutical preparations. // J. Chromatogr. A. 1994. V. 670. P. 209-214.

50. Jegle U. Separation of water-soluble vitamins via capillary zone electrophoresis. //J. Chromatogr. A. 1993. V. 652. P. 495-501.

51. Huopalahti R., Sunell J. Use of capillary zone electrophoresis in the determination of Вб vitamins in pharmaceutical products. // J. Chromatogr. A. 1993. V. 636. P. 133-135.

52. Horie H., Mukai Т., Kohata K. Simultaneous determination of qualitatively important components in green tea infusions using capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 758. P. 332-335.

53. Terabe S., Otsuka K., Ichikawa K. et al. Electrokinetic separations with micellar solutions and open-tubular capillaries. // Anal. Chem. 1984. V. 56. P. 111-113.

54. Mukai Т., Kohata K. Simultaneous analysis of water-soluble vitamins using capillary electrophoresis. // HP Appl. Notes. 1994. P. 4.

55. Kibbey E., Meyerhoff M.E. Micellar electrokinetic chromatographic analysis of water-soluble vitamins and multi-vitamins integrators. // Electrophoresis. 1994. V. 15. P. 1147-1150.

56. Lin Z., Gao. H. Determination of nicotinamide and vitamin Вб by micellar electrokinetic capillary chromatography. //Yaowu-Fenxi-Zazhi. 1998. V. 22. P. 273-276.

57. Gomis D.B., Gonzalez L.L., Gutidrrez-Alvarez D. Micellar electrokinetic capillary chromatography analysis of water-soluble vitamins. // Anal. Chim. Acta. 1999. V. 396. P.55-60.

58. Fujiwara S., Iwase S., Honda S. Analysis of water-soluble vitamins by micellar electrokinetic capillary chromatography. // J. Chromatogr. 1988. V. 447. P. 133-140.

59. Garcia L., Blazquez S., San Andres M.P., Vera S. Determination of thiamine, riboflavin and pyridoxine in pharmaceuticals by synchronous fluorescence spectrometry in organized media. // Anal. Chim. Acta. 2001. V. 434. P. 193-199.

60. Yik Y.F., Lee H.K., Li S.F.Y., Khoo S.B. Micellar electrokinetic capillary chromatography of vitamin Вб with electrochemical detection. // J. Chromatogr. 1991. V. 585. P. 139-144.

61. Olsson J., Nordstrom O., Nordstrom A.-C., Karlberg B. Determination of ascorbic acid in isolated pea plant cells by capillary electrophoresis and amperometric detection. Hi. Chromatogr. A. 1998. V. 826. P. 227-233.

62. Досон P., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика. М.: Мир. 1991.544 с.

63. Практические работы по адсорбции и газовой хроматографии / Под ред. А. В. Киселёва. М.: МГУ, 1968. 285 с.

64. Чудук Н.А., Эльтеков Ю.А. Адсорбция кислородосодержащих ароматических соединений в н-гептане кремнеземом. // Журн. физ. химии. 1981. Т. 55. С.1010-1015.

65. Успехи химии порфиринов. Т. 2 / Под ред. О.А. Голубчикова. С-Пб: НИИ Химии СпбГУ, 1997. 336 с.

66. Амин Н.Х., Некрасова Л.И., Борисенкова С.А. Адсорбция фталоцианина кобальта на силохроме и спектральные свойства поверхностных слоев. // Журн. физ. химии. 1979. Т. 53. С.2071-2074.

67. Tabata К., Fukushima К., Oda К., Okura I. Selective aggregation of zinc phthalocyanines in the skin. // J. Porphyrins Phthalocyanines. 2000. V.4. P. 278-284.

68. Мамлеева H.A. Моделирование межмолекулярных взаимодействий хлорофилла in vivo в системах с адсорбционно-иммобилизованным пигментом. // Журн. физ. химии. 1990. Т. 64. С. 593-609.

69. Борисенкова С.А. Адсорбционные фталоцианиновые катализаоры . Методы получения, структура слоя, каталитическая активность. // Вестн. Моск. ун-та. Сер.2. Химия. 1984. Т. 25. С.427-438.

70. Лабораторное руководство по хроматографии и смежным методам. В 2-х т. Т. 1. / Под ред. В.Г. Березкина. М: Мир, 1982. С. 63.

71. К. Stulik, V. Pacakova, J. Suchankova, H. Claessens // Stationary phases for peptide analysis by HPLC: a review. Anal. Chim. Acta. 1997. V.352. P. 119.

72. Мамлеева Н.А., Некрасов Л.И. Влияние растворителя на межмолекулярные взаимодействия хлорофилла и феофитина в адсорбированном состоянии. // Журн. физ. химии. 1989. Т. 63. С. 735-741.

73. Camp P.J., Jones А.С., Neely R.K., Speirs N.M. Aggregation of copper(II) tetrasulfonated phthalocyanine in aqueous salt solutions. // J. Phys. Chem A. 2002. V.106. P. 10725-10732.

74. Shutte W.J., Sluyters-Rehbach M., Sluyters J.H. Aggregation of an octasubstituted phthalocyanine in dodecane solutions. // J. Phys. Chem. 1993. V.97. P.6069-6073.

75. Празова И.В., Мамлеева H.A., Борисенкова C.A. Адсорбционные слои карбоксипроизводного фталоцианина кобальта на поверхностях различного типа. //Журн. физ. химии. 1991. Т.65. С. 1878-1885.

76. Березин Б.Д., Ениколопян Н.С. Металлопорфирины. М.: Наука, 1988. 160 с.

77. Schipper Е., Heuts J., Pickaers R. et al. Role of polycation promoters in the cobalt(II) phthalocyaninetetracarboxylic and -octacarboxylic acid-catalyzed autoxidation of mercaptoethanol. // J. Polymer Science A. 1995. V.33. P.1841-1848.

78. Березин Б.Д. Координационные соединения порфиринов и фталоцианинов. М.: Наука, 1978. 274 с.

79. Успехи химии порфиринов. Т. 3 / Под ред. О.А. Голубчикова. С-Пб: НИИ Химии СпбГУ, 1997. 358 с.

80. Дворкин В.И., Горбунов Ю.Г., Жилов В.И. и др. Тетра-15-краун-5-фталоцианат кобальта как реагент для спектрофотометрического определения калия и натрия в среде хлороформ-этанол-вода. // Журн. аналит. химии. 2002. Т.57. С.661-665.

81. Kumar G.A., Thomas J., Unnikrishnan N.V. et al. Optical absorption and emission spectral studies of phthalocyanine molecules in DMF. // J. Porphyrins Phthalocyanines. 2001. V.5. P. 456-459.

82. Булатов М.И., Калинкин И.П. Практическое руководство по фотоколориметрическим и спектрофотометрическим методам анализа. С-Пб: Химия, 1972. 407 с.

83. Комлева И.Л., Митрофанова А.Н., Некрасова Л.И. Адсорбционные слои хлорофилла и феофитина на аминированной поверхности кремнезема. //Журн. физ. химии. 1987. Т.61. С.2754-2758.

84. Modern chromatography analysis of vitamins. / Edited by Leenhereer A.P., Lambert W.E., Bocxlaer L.F. New York: Marcel Dekker, Inc. 2000. 632p.

85. Рубан В.Ф., Беленький Б.Г. Определение фенолов в водных растворах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на микроколонках. // Журн. аналит. химии. 1988. Т.63. С.1307-1312.

86. Белямова Т.Т., Коренман Я.И., Фокин В.Н., Яшин Я.И. Жидкостная хроматография фенола с электрохимическим детектированием. // Журн. физ. химии. 1994. Т.68. С. 1877-1879.

87. Коренман Я.И. Экстракция фенолов. Горький: Волго-вятское книжное изд-во. 1973. 207с.

88. Родионов В.И., Верповский Н.С., Назаренко В.В. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография моно-, ди- и трициклогесилфенолов. // Журн. аналит. химии. 1988. Т.63. С.507-600.

89. ЮЗ.Ланин С.Н., Никитин Ю.С., Сыроватская Е.В. Адсорбция изомеров нитрофенола из трехкомпонентных растворов на гидроксилированном силикагеле. // Журн. физ. химии. 1993. Т.67. С.1658-1664.

90. Chee К.К., Lan W.G., Wong М.К., Lee H.K. Optimization of liquid chromatographic parameters for the separation of priority phenols by using mixed-level orthogonal array design. // Anal. Chim. Acta. 1996. V.312. P.271-280.

91. Ланин С.И., Лигаев А.И., Никитин Ю.С. Определение фенолов в водных растворах высокоэффективной жидкостной хроматографией. //Журн. аналит. химии. 1986. Т.61. С. 1411-1417.

92. Юб.Ланин С.Н., Ланина Н.А., Никитин Ю.С. Влияние ассоциации молекул сорбата и модификатора в подвижной фазе на удерживание в высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. физ. химии. 1995. Т.69. С.2045-2051.

93. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии / Под ред. Хеншена А., Хупе К.-П., Лотшпайха Ф., Вельтера В. М.: Мир, 1988. 688 с

94. Парфит Г. , Рочестер К. Адсорбция из растворов на поверхностях твердых тел. М.: Мир, 1986. 488 с.

95. Mayer В. X. How to increase precision in capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 907. P. 21-37.

96. Руденко Б.А., Руденко Г.И. Высокоэффективные хроматографические процессы. М.: Изд-во РАН. 2002. 254 с.

97. Weldon М.К., Arlington С.М., Runnels P.L., Wheeler J.F. Selectivity enhancement for free zone capillary electrophoresis using conventional ion-pairing agents as complexing additives. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 758. P. 293-302.

98. Altria K.D., Kelly M.A., Clare B.J. Current applications in the analysis of pharmaceuticals by capillary electrophoresis. // Trends in analytical chemistry. 1998. V.17. P.214-226.