Водорастворимые порфирины и фталоцианины как модификаторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.02 ВАК РФ
Мочалова, Вера Сергеевна
АВТОР
|
||||
кандидата химических наук
УЧЕНАЯ СТЕПЕНЬ
|
||||
Москва
МЕСТО ЗАЩИТЫ
|
||||
2006
ГОД ЗАЩИТЫ
|
|
02.00.02
КОД ВАК РФ
|
||
|
На правах рукописи
Мочалова Вера Сергеевна
ВОДОРАСТВОРИМЫЕ ПОРФИРИНЫ И ФТАЛОЦИАНИНЫ КАК МОДИФИКАТОРЫ В ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ И КАПИЛЛЯРНОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ
02.00.02 - аналитическая химия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук
Москва - 2006
Работа выполнена на кафедре аналитической химии химического факультета Московского государственного университета им М.В. Ломоносова.
Научный руководитель-
кандидат химических наук, доцент Брыкина Галина Демьяновна
Официальные оппоненты:
доктор химических наук, профессор Ланин Сергей Николаевич доктор химических наук, вед н с. Тимербаев Андрей Роландович
Ведущая организация.
Институт химии растворов РАН (г. Иваново)
Защита состоится 1 марта 2006 г. в 16 часов 15 минут в ауд. 344 на заседании диссертационного Совета Д 501.001 88 по химическим наукам при Московском государственном университете им M В Ломоносова по адресу 119992, Москва, Ленинские горы, МГУ, химический факультет.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке химического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова.
Автореферат разослан «-50» января 2006г.
Ученый секретарь диссертационного Совета,
кандидат химических наук Торочешникова И.И
и
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В работе исследовано влияние водорастворимых порфиринов и фталоцианинов на селективность разделения в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе. При постановке работы мы учитывали, что ВЭЖХ и КЭ дополняют друг друга, используются практически в одних и тех же областях науки и техники и для повышения селективности хроматографического и элекгрофоретического разделения применяются аналогичные приемы. Перспективно получение простыми методами новых адсорбентов на основе известных матриц для внедрения их в аналитическую практику.
В качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов нами использованы водорастворимые порфирины и фталоцианины, которые сравнительно мало изучены, однако, благодаря уникальности строения молекул способны к взаимодействиям с активными центрами поверхностей, сорбатами, полиэлектролитами, подвижными фазами, их состояние в растворе существенно зависит от рН.
В качестве сорбатов были выбраны, с одной стороны, хорошо изученные фенолы, как для уточнения механизма их сорбции на модифицированных сорбентах, так и для тестирования колонок; с другой стороны -водорастворимые витамины, проблема определения которых в обьектах все еще актуальна ввиду сложности, недостаточной экспрессности и селективности существующих методик. Данных по удерживанию водорастворимых витаминов на модифицированных порфиринами и фталоцианинами колонках в литературе нет. Нет данных также по электрофоретическому поведению витаминов в кварцевых капиллярах при использовании рабочих буферных растворов, содержащих эти модификаторы
Цепь работы: исследование селективности хроматографического и электрофоретического разделения, на примере фенолов и водорастворимых витаминов, при использовании порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов.
В постановке задач и обсуждении результатов диссертационной работы активное участие принимал доктор химических наук, профессор Шпигун О .А.
Конкретные задачи исследования:
• изучить адсорбцию модификаторов в статических и динамических условиях, оценить устойчивость модифицированных сорбентов в условиях
вэжх
• рассмотреть механизмы закрепления модификаторов на поверхности сорбентов
• спектроскопически исследовать взаимодействия модификаторов с полиэлектролитом и водорастворимыми витаминами в растворах и на поверхности сорбента для интерпретации экспериментальных данных
• разработать методики получения модифицированных сорбентов за счет физической адсорбции
• сравнить селективность разделения сорбатов на модифицированных и немодифицированных колонках
• оценить воспроизводимость коэффициентов емкости на модифицированных колонках
• оценить селективность разделения витаминов в динамически модифицированных кварцевых капиллярах
Научная новизна. Получены новые адсорбенты путем физической иммобилизации порфиринов и фталоцианинов на сорбентах на основе различных матриц. Модифицировали ЭЛавогЬ-С^, □¡аэрИег-1 Ю-С18, 01аБогЬ-130-С!, 0!авогЬ -130-С4, КазогЬ -130-С1в, БрЬегоп 100 (1.С), ЗрИегоп С 1000, НЕМА в 1000 (ЗЦ №с1ео8Н вВ в статических и динамических условиях. Адсорбцию проводили в присутствии полиэлектролита хлорида полидиаллилдиметиламмония В условиях ВЭЖХ на модифицированных сорбентах исследовано поведение ряда водорастворимых фенолов и витаминов. Данные по хроматографическому удерживанию сорбатов на ЭрИегоп С 1000 и 01азрЬег-110-С1в обработаны согласно моделям Скотта-Кучеры, Снайдера-Сочевинского. Рассчитаны изотермы адсорбции ряда витаминов из данных ВЭЖХ Предложена теоретическая интерпретация полученных результатов, рассмотрены возможные механизмы удерживания модификаторов на сорбентах и сорбатов на модифицированных сорбентах.
Водорастворимые порфирины и фталоцианины предложены в качестве модификаторов для динамического модифицирования капилляра в капиллярном зонном электрофорезе. Исследована зависимость скорости и направления электроосмотического потока, электрофоретической
подвижности, селективности и эффективности разделения водорастворимых витаминов от природы и количества модификатора.
В динамически модифицированном капилляре показана возможность селективного разделения никотинамида и цианокобаламина, увеличение чувствительности определения цианокобаламина. В капиллярном зонном электрофорезе названные витамины не разделяются
Практическая значимость. Предложены простые методики получения новых адсорбентов на основе известных матриц. Представлены примеры разделения модельных смесей замещенных фенолов и водорастворимых витаминов. Возможно разделение пяти витаминов за 20 мин в изократическом режиме на модифицированных N0016081! БВ и шести витаминов за 15 мин на □¡азрЬег-110-С18. Выполнено разделение смеси никотинамида и цианокобаламина методом КЗЭ в присутствии модификаторов. Проанализированы фармацевтические препараты, содержащие водорастворимые витамины, на модифицированных сорбентах в условиях ВЭЖХ и в динамически модифицированных капиллярах методом КЗЭ. В препарате «Пентовит» определен витамин В12.
На защиту выносятся:
• Результаты исследования адсорбции окга-4,5-карбоксифтапоцианата цинка (гпРс) и 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX (Н2ОР) в статических и динамических условиях, устойчивости модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ и механизмов закрепления модификаторов на поверхности сорбентов.
• Результаты спектроскопического исследования взаимодействия модификаторов с полиэлектролитом хлоридом полидиаллилдиметиламмония (ПДА) и водорастворимыми витаминами в растворах и на поверхности сорбента.
• Данные по изучению адсорбции водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ, расчету изотерм адсорбции и термодинамических параметров адсорбции.
• Выводы о применимости моделей Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского к описанию удерживания фенолов на модифицированных 01аврИег-110-С18 и БрЬегоп С 1000.
• Данные по разделению сорбатов на модифицированных и немодифицированных колонках, а также в динамически
модифицированных окта-4,5-фталоцианином (Н2Рс), дигидрохлоридом гематопорфирина (HP), 3,8-ди(1-метоксиэтип)дейтеропорфирином IX кварцевых капиллярах.
• Условия и результаты количественного определения водорастворимых витаминов в фармацевтических препаратах методами ВЭЖХ и КЗЭ
• Выводы о селективности хроматографического и электрофоретического разделения фенолов и водорастворимых витаминов при использовании порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов
Апробация работы. Результаты работы доложены на международных конференциях «Ломоносов-2003», «Ломоносов-2004», «Ломоносов-2005» (Москва, 2003, 2004, 2005), «100 years of chromatography» (Moscow, Russia, 2003), IX Международной конференции по химии порфиринов и их аналогов, (Суздаль, Россия, 2003), всероссийских конференциях «Аналитика России» (Клязьма, 2004), VI Школа-конференция молодых ученых стран СНГ по химии порфиринов и родственных соединений (Санкт-Петербург, 2005).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и 7 тезисов докладов.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырех глав экспериментальной части, общих выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Материал диссертации изложен на 156 страницах машинописного текста, содержит 43 рисунка и 28 таблиц, в списке цитируемой литературы 112 наименований.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Обзор литературы
Обзор литературы посвящен применению порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз для высокоэффективной жидкостной хроматографии и модификаторов внутренней поверхности капилляра в капиллярном электрофорезе. Так же в обзор литературы включен раздел по определению водорастворимых витаминов методами ВЭЖХ и КЭ. На основе литературных данных обоснованы и конкретизированы задачи диссертационной работы.
Исходные вещества, сорбенты, аппаратура
В качестве модификаторов использовали окга-4,5-карбоксифталоцианин и его комплекс с цинком, синтезированные в Ивановском государственном химико-технологическом университете; 3,8-ди(1-метоксиэтил)
дейтеропорфирин IX, гематопорфирин дигидрохлорид, гемин, синтезированные на кафедре биохимии Московской государственной академии тонкой химической технологии. Индивидуальность соединений подтверждена данными элементного анализа, ВЭЖХ и ИК спектроскопии. Использовали полиэлектролит - хлорид полидиаллилдиметиламмония «Sigma» (Германия).
Для модифицирования использовали гидрофобные носители для ВЭЖХ -Silasorb-C18, Diasorb-130-Ci С4, C16, Diaspher-110-Ci8> все «БиоХимМак» (Россия), а также ионообменники низкой емкости на основе полиметакрилата - Spheron С 100 (LC), Spheron С 1000, «Lachema» (Чехословакия); НЕМА S 1000 QL «Tessek» (Чехословакия) и силикагеля - Nucleosil SB «Harchercy-Nagel» (Германия).
Хроматографическое поведение соединений исследовали в системе ВЭЖХ, состоящей из насоса «Марафон» (Россия), спектрофотометрического детектора «Biotronik ВТ-8200» (Германия), стальной колонки 100x4мм, упакованной вышеперечисленными сорбентами. Объем пробы 20 мкл, длина волны детектирования 254, 280 нм, чувствительность 0,04, расход подвижной фазы составлял 0,3 -1 мл/мин. Мертвое время определяли по удерживанию несорбируемых компонентов: 45-60 с. Использовали также микроколоночный жидкостной хроматограф Милихром-4 с колонкой из нержавеющей стали 80x2мм, заполненной сорбентом Diaspher-110-C18 (масса сорбента 0,125 г), модифицированным окта-4,5-карбоксифталоцианатом цинка в присутствии полиэлектролита ПДА. Расход подвижной фазы составлял 200 мкл/мин, объём пробы 5-10 мкп. Скорость движения диаграммной ленты самописца 0,3-3 см/мин. Детектирование проводили при А=204 или 254 нм. Чувствительность детектора 5 мВ/см. Мертвый объем 145 мкл.
Электрофоретическое поведение соединений изучали в электрофоретической системе «Капель 103Р», «Капель 105Р» фирмы «Люмэкс» (Россия). Пробу вводили под давлением 30 мбар, время ввода 5 с. Длина волны детектирования 210, 254, 360 нм. Скорость электроосмотического потока определяли по времени миграции вещества, нейтрального в условиях КЗЭ - ацетону. Анализ проводили при напряжении 15 кВ. Общая длина кварцевого капилляра 60 см, эффективная - 50 см,
диаметр - 75 мкм. Каждый опыт проводили не мене трех раз. Запись и обработку элекгрофореграмм проводили при помощи компьютерной программы «Мультихром» (версия 1.5).
ЭСП измеряли на спектрофотометре «Shimadzu 2201» (Япония), спектры ДО - на «Спекгротоне» (Узбекистан) pH растворов контролировали универсальным рН-метром со стеклянным электродом "АНИОН" ИПП «Инфраспак-Аналит» (Россия) Взвешивали на аналитических весах AG-204 Deta Range фирмы «Mattler Toledo».
Гетерогенизация порфиринов и фталоцианинов на сорбентах для высокоэффективной жидкостной хроматографии
Одним из способов гетерогенизации порфириновых и фталоцианиновых комплексов является адсорбция из растворов. Адсорбцию модификаторов изучали в статических и динамических условиях на сорбентах различной природы для обращено-фазовой и ионообменной ВЭЖХ.
На гидрофобизированных силикагелях модификатор ZnPc не адсорбируется. Аналогично ведет себя и полиэлектролит - хлорид полидиаплилдиметиламмония. В присутствии полиэлектролита сорбция модификатора не превышает 20% Наиболее подходят для иммобилизации модификатора сорбенты марки Диасорб (рис. 1). Адсорбция фталоцианата из водно-диметилформамидных растворов в присутствии ПДА увеличивается на 5-8% по сравнению с таковой из водных растворов (рис. 2). Для сорбентов марки Диасорб-С4 и -С16 наибольшая адсорбция из водных растворов отмечена при мольном соотношении ZnPc и ПДА 1:2 (рис. 3).
»V20,
15
■ю
5
о
Diasoib Diasoib Diasofb Silasorb
CI C4 C16 CI8
Сопбентм
Рис. 1. Величина адсорбции ZnPc в присутствии ПДА на сорбентах разных марок. Л max, нм: 360 (1), 620 (2), 690 (3).
Я 0.95 ,
0,9 -) 0.85 0,8 0,75
0,7
380 480 580 680
Длина вшвш, ■
Рис. 2. Спектры ДО адсорбатов гпРс из водного раствора ПДА на 01а&огЬ-С1в (1, 2), на ЗИавогЬ-С« (3, 4), в присутствии 20% ДМФА (2, 4).
о,в -
зво
немодифицированный сорбент
480
580 680 780
длит волны, им
Рис. 3. Спектры ДО гпРс 1х10"5 М из водного раствора на ИаэогЬ -С4(1) и -С16 (2) в присутствии ПДА; мольное отношение ПДА£пРс = 2.
Исследование спектров ДО позволило сделать вывод о способе закрепления модификатора на сорбенте и его распределении в хроматографической колонке. Известно, что химическая адсорбция модификаторов на поверхности сорбентов сопровождается заметными спектральными изменениями, а именно появлением новых полос в спектре ДО и смещением максимума при 690 нм в коротковолновую область. Отсутствие подобных спектральных изменений подтверждает физический характер адсорбции. Сопоставление спектров ДО адсорбатов 1пРс (рис. 4) показывает, что адсорбция в динамических условиях больше, чем в статических, однако приводит к неравномерному заполнению поверхности модификатором.
0,00 -I--1-т- ---—
380 460 540 620 700
Длинш волны, нм
Рис. 4. Спектры ДО адсорбатов ZnPc на Silasorb-C18, полученные в статических (1,2) и динамических (3,4) условиях в присутствии ДМФА (2), в нижней (3) и верхней (4) частях колонки.
Наличие в молекуле ZnPc гидрофильных карбоксильных групп обусловливает адсорбцию соединения на поверхности слабокислотных катионообменников. Наибольшая адсорбция модификатора (%) отмечена на Spheron С 1000 после предварительной обработки его раствором полиэлектролита:
Сорбент Адсорбция
в отсутствие ПДА в присутствии ПДА после обработки ПДА
Spheron 100 (LC) 18,8 9,7 57,1
Spheron С 1000 57 45,1 84
Последнее возможно связано с образованием ассоциата на поверхности сорбента по механизму ионного обмена:
R-COOH + R-CI = [R-COOR*]Cr + Н+ Модификаторы ZnPc и H2DP на анионообменниках НЕМА S 1000 QL и Nucleosil SB адсорбируются за счет электростатических и частично гидрофобных взаимодействий в отсутствие полиэлектролита. Зависимость количества модификатора на поверхности НЕМА S 1000 QL от его концентрации в растворе прямолинейна. Это и отсутствие плато позволяет предположить мономолекулярный характер заполнения поверхности модификатором.
Для выяснения механизма адсорбции и удерживания модификатора спектрофотометрическим методом изучено поведение модификаторов в растворе в присутствии полиэлектролита. Показано, что при мольном соотношении ZnPc и ПДА равном 1:2 между формами мономер^димер наступает равновесие. При этом соотношении реагентов наблюдается наибольшая адсорбция ZnPc из раствора в присутствии полиэлектролита.
На основании экспериментальных данных рассчитано количество модификатора на поверхности сорбентов. Оно составляет от 0,075 до 1,2 мкмоль/г. Разработаны методики получения модифицированных сорбентов в статических и динамических условиях.
Сравнение спектров ДО адсорбатов модификаторов до и после работы в условиях ВЭЖХ в различных подвижных фазах доказывает стабильность полученного покрытия и подтверждает возможность использования полученных сорбентов в условиях ВЭЖХ.
Модифицированные сорбенты как неподвижные фазы в ВЭЖХ
Хроматографическое поведение фенолов изучали на сорбентах разной гидрофобности, модифицированных ZnPc в динамических (Silasorb-C18, Díaspher-110-Cie) и статических (Diasorb-C*) условиях. Порядок элюирования фенолов и соответствует увеличению их гидрофобности:
Silasorb-C1B - ZnPc оМН2-<резорцин<фенол<п-Ы02-
Diaspher-110-C1B-ZnPc резорцин < 5-NO2-2-NH2- < n-NOjr < o-CI- < м-CI-
Diasorb-C4- ZnPc резорцин<фенол<5-М02-2-ЫН2<п-М02-<п-С1-
Получены хроматограммы модельной смеси 5 фенолов на модифицированных сорбентах (рис. 5). Порядок выхода фенолов на модифицированном и немодифицированном БрЬегоп С 1000 практически не изменяется:
ЭрЛе/ол С1000 резорцин< фенол< о-С1-< п-ЫОг< 2-МНг5-МО;г- < п-С1- < м-С1-
БрЬегоп С 1000, модифицированный в статических условиях п-ЫО2-< резорцин< фенол< о-С1-<2-ЫНг^Оу-< м-С1-< п-С1-
1
Рис. 5. Хроматограмма модельной смеси
фенолов: резорцин (1), 2-амино-5-нитрофенол (2), п-нитрофенол (3), о-хлорфенол (4), м-хлорфенол (5); ПФ: АН (32%) - Н3Р04 (0,1%) -ЫаС1 (0,1М), рН 2,66; А 280 нм.
На модифицированном ЭрИегоп С 1000 возрастает время удерживания соединений, что подтверждает наличие взаимодействий модификатор -сорбат (рис. 6).
Для выяснения механизма удерживания фенолов на модифицированном вр11егоп С 1000 и 0'1а8рЬег-110-С18 из водно-ацетонитрильных подвижных фаз была оценена возможность описания экспериментальных данных уравнениями Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского (рис. 7, 8). Как видно, вытеснительные модели адекватно описывают экспериментальные данные в ограниченной области концентраций АН. Отклонения от линейности в области как малых, так и больших концентраций АН в элюенте связано с наличием межмолекулярных взаимодействий в ПФ и анионообменного взаимодействия с сорбентом. Отметим также, что наибольшее удерживание фенолов наблюдается при малых концентрациях АН, что согласуется с литературными данными.
Рис. 6. Коэффициенты емкости фенола и его производных на врИегоп С 1000 немодифицированном (1) и модифицированном 2!пРс в статических (2) и динамических условиях (3); ПФ: АН (32%)-Н20; А 280 нм.
Рис 7. Зависимость обратной величины коэффициента емкости от мольной доли ацетонитрила в подвижной фазе на СгаврИег-ИО-С^.
1,6
и
0.8
0.4
4|М
Рис. 8. Зависимость логарифма коэффициента емкости от логарифма мольной доли ацетонитрила в подвижной фазе на ОгаврйеМ 10-С1В.
На НЕМА 8 1000 01, модифицированном в статических условиях, в оптимальных условиях получена хроматограмма модельной смеси 8 фенолов (рис. 9). Селективность исследуемых сорбентов зависит от наличия модификатора и способа получения модифицированного сорбента. Но это не влияет на порядок выхода соединений.
Получены следующие ряды удерживания витаминов на модифицированных анионообменниках в боратном и фосфатном буферном растворах:
Рис. 9. Хроматограмма модельной смеси фенолов: о-аминофенол (1), резорцин (2), фенол (3), о-хлорфенол (4), 2-ЗМИНО-5-нитрофенол(б), п-нитрофенол (6), м-хлорфенол(7), п-хлорфенол (8) на колонке НЕМА Б 1000 01, модифицированной ТпРс в статических условиях; ПФ: АН (8%)-боратный буферный раствор (50 мМ), рН 10,0; Л 280 нм.
0 4 8 12 16 30 24
НЕМА в 1000-
модификатор (мкмоль/г)
боратный буферный раствор, рН 9,18
Н2ОР (0,65)
В12<В15НА5В6<С5НК<В2
Н2ОР(1,3)
В12<В1 5 НА 5 Вв* С £ НК < Вг
гпРс(0,65)
В12< НА<С < Ве< НК< В2
Л/ис/еов// вв, ПФ- АН (8%) - фосфатный буферный раствор (рН 6,86)-
В, 5 В« 5 Ве £ НА <С < Вг < РР Селективность и порядок выхода витаминов в данных условиях зависят от используемого модификатора, природы неподвижной фазы и состава элюента. При увеличении количества модификатора на НЕМА в 1000 порядок выхода не изменяется, но время удерживания всех исследуемых витаминов уменьшается. Это может быть связано с экранированием гидрофобными участками молекул модификатора групп четвертичного аммониевого основания на поверхности сорбента. В оптимальных условиях получены хроматогаммы модельных смесей витаминов на сорбентах, модифицированных гпРс. На модифицированной колонке НЕМА в 1000 01 возможно разделение шести витаминов до базовой линии при скорости элюента 0,3 мл/мин (рис. 10). Время выхода Вг при этом составляет 1час 40 мин, на хроматограмме не показан. На модифицированном □¡аэрИег-ИО-С^ удалось разделить шесть витаминов в течение 15 минут (рис. 11). Согласно литературным данным, чаще всего удается разделение смесей, состоящих из 3-5 водорастворимых витаминов за 20-40 мин в градиентном режиме или в условиях ион-парной ВЭЖХ. Поэтому наша методика определения витаминов не уступает, а ряде случаев и превосходит по селективности, эффективности и экспрессносги известные из литературы методики разделения и определения водорастворимых витаминов.
Для интерпретации результатов были измерены ЭСП сорбатов в отсутствие и присутствии модификаторов, подтверждены взаимодействия мееду ними, а также рассчитаны изотермы адсорбции витаминов по данным ВЭЖХ методом Глюкауфа (рис. 12). Рассчитаны оценочные величины термодинамических параметров, характеризующих процесс адсорбции:
Витамин Емкость монослоя а„, 10е, моль/г Константа адсорбции К-10"3, л/моль * "»' гыМСпипПС ИИ Гиббса адсорбции АС, кДж/моль
С 18,5 0,05 -9,5
Вз 3,6 0,73 -16,1
Вв 4,3 1,64 -18,0
НА 2,5 4,10 -20,2
Рис. 10. Хроматограмма Рис. 11. Хроматограмма модельной
модельной смеси витаминов на смеси витаминов на О'шврЬег-ИО-С« -
НЕМА Б 1000 01 - гпРс; Г!Ф: гпРс; ПФ: фосфатный буферный раствор
боратный буферный раствор (10 (10 мМ), рН 6,86; Л 204 нм. мМ), рН 9,18; V элюента: 0,3 мл/мин.
Рис. 12. Изотермы адсорбции витаминов (Т = 20°С); ПФ: 10 мМ фосфатный буфер, рН 6,86; А 204 нм.
Форма изотермы адсорбции дает качественную информацию о природе взаимодействия растворенное вещество - поверхность. Таким образом, анализ изотерм адсорбции позволяет получить полезную информацию о механизме адсорбции некоторых водорастворимых витаминов. Экспериментальные данные подтвердили перспективность использования модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ.
Порфирины и фталоцианины как модификаторы в капиллярном зонном электрофорезе
При выборе условий электрофоретического разделения водорастворимых витаминов и интерпретации результатов мы учитывали заряд внутренней поверхности кварцевого капилляра до и после динамического модифицирования; направление и скорость электроосмотического потока, а также состояние водорастворимых витаминов в растворе в зависимости от рН и их взаимодействия с модификаторами.
В начале работы были выбраны оптимальные условия определения и разделения водорастворимых витаминов в КЗЭ в отсутствие модификатора. Известно, что электроосмотический поток в кварцевых капиллярах зависит от рН и концентрации раствора электролита. Оптимальным для разделения стандартной смеси витаминов оказался рН 9,18 (боратный буферный раствор) (рис. 13). Все витамины, кроме НА и В12. при этом рН электролита разделяются в соответствии с величинами своей электрофоретической подвижности. В этих условиях витамин В1 заряжен положительно и движется в одном направлении с ЭОП, поэтому время его выхода из капилляра мало по сравнению с остальными витаминами, он детектируется до системного пика. Витамин В12 и НА незаряжены, выходят одним пиком за счет слабых межмолекулярных взаимодействий, их переносит электроосмотический поток. Остальные витамины, существующие в виде анионов, перемещаются к катоду медленнее ЭОП.
Для определения оптимальной концентрации боратного буферного раствора были проанализированы стандартные смеси витаминов в диапазоне его концентраций 5 - 30 мМ (рис. 14). Для дальнейшей работы был выбран буферный раствор с концентрацией 10 мМ, разделение в котором прошло достаточно селективно и быстро. Далее были выбраны порфирины и фталоцианины для модифицирования буферного раствора.
Рис 13 Электрофореграмма смеси 8 водорастворимых витаминов; 10 мМ боратный буферный раствор (рН 9,18); А 254 нм.
Рис. 14. Зависимость ^ водорастворимых витаминов от концентрации боратного буферного раствора (рН 9,18).
ито происходит при введении модификатора? Отметим, что модификаторы существуют в щелочной среде в виде анионов, поэтому практически не взаимодействуют с отрицательно заряженной поверхностью кварцевого капилляра, т.е. формирование узких зон витаминов в КЗЭ происходит непосредственно в среде электролита без взаимодействий с внутренней поверхностью капилляра. Направление ЭОП сохраняется. Скорость его в присутствии модификаторов различной природы изменяется неоднозначно. При использовании дигидрохлорида гематопорфирин, 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX, окта-4,5-карбоксифталоцианина возможно селективное разделение смеси из восьми витаминов, в том числе В12 и никотинамида (рис.15). Порядок выхода витаминов в присутствии модификаторов различной природы практически не изменяется и соответствует величине заряда и радиусу ионов. Наибольшая чувствительность определения В12 отмечена в присутствии дигидрохлорида гематопорфирина при 360 нм (рис. 16).
При динамическом модифицировании капилляра селективному разделению витамина В12 и никотинамида, вероятно, способствует конкурирующий процесс образования межмолекулярного ассоциата никотинамида и модификатора посредством водородных связей между амидной фуппой никотинамида и заместителями в порфириновом кольце модификатора. Это подтверждается увеличением интенсивности и сдвигом полосы Соре в электронном спектре поглощения модификатора.
Рис. 15. Электрофореграмма смеси водорастворимых витаминов; 10 мМ боратный буферный раствор (рН 9,18) - Н2ОР (9x10"4 М), А 254 нм.
250 Н
200
100
150
50
О
"1254
■ 2Н
■ за
нет Н2Рс НР Н2РР
ИЩМфОИОР
Рис. 16. Зависимость площади пика В12от вида модификатора и длины волны детектирования.
В условиях ВЭЖХ и капиллярного зонного электрофореза в присутствии модификаторов порфиринов и фталоцианинов были проанализированы фармацевтические препараты. Полученные результаты согласуются с паспортными данными анализируемых образцов.
Можно предположить, что в ВЭЖХ и КЗЭ на селективность разделения сорбатов влияют взаимодействия одних и тех же типов: гидрофобные (для соединений, содержащих ароматические системы), электростатические (между положительно заряженным атомом металла в порфирине и анионами витаминов) и аксиальная координация безметальных модификаторов центральным атомом металла витамина (например, цианокобапамина) и др. Также свой вклад в удерживание и электрофоретическую подвижность разделяемых соединений вносит образование водородных связей между аминофуппами витаминов и пиррольными атомами азота молекулы порфирина.
1. Методом ДО подтвержден физический характер адсорбции модификаторов окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка и 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX в присутствии полиэлектролита
Выводы
хлорида полидиаллилдиметиламмония на сорбентах для обращено-фазовой и ионообменной ВЭЖХ - вНаэогЬ-С^, □¡абрЬег-110-С18, С)|'аБОгЬ-130-С,, 0'1авогЬ-130-С4, 0'|а80гЬ-130-С16, БрЬегоп 100 (1С), ЭрИегоп С 1000, НЕМА Э 1000 <21-, Ыис1ео8Н ЭВ. Предложены методики получения модифицированных сорбентов. Показана устойчивость модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ.
2. Спектрофотометрическим методом исследовано состояние окта-4,5-карбоксифтапоцианата цинка в растворе в присутствии полиэлектролитов. Предложены механизмы адсорбции окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка на гидрофобизированных силикагелях и катионообменниках на основе полиметакрилатной матрицы в присутствии полиэлектролита; 3,8-ди(1-метоксиэтил) дейтеропорфирина IX на анионообенниках на основе силикагеля и полиметакрилатной матрицы.
3. Найдены условия разделения семи фенолов на модифицированном НЕМА в 1000 01. и пяти фенолов на модифицированном □¡а8рИег-110-С18 Порядок выхода фенолов соответствует увеличению их гидрофобности. Вытеснительные модели Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского для 01а$рЬег-110-С18 адекватно описывают экспериментальные данные в диапазоне 8 - 70 % полярной добавки подвижной фазы, для ЗрИегоп С 1000 в диапазоне 8 - 50%.
4. Найдены условия для разделения стандартной смеси 6 водорастворимых витаминов на модифицированном 01а8рНег-110-С1в в течение 15 мин и 5 витаминов на Ыис1еовП ЭВ в течение 20 мин. Рассчитаны их изотермы адсорбции по методу Глюкауфа и некоторые термодинамические параметры адсорбции (ат, К, Дв). Построены шкалы селективности.
5 Установлено, что для динамического модифицирования капилляра наиболее подходят оюа-4,5-карбоксифталоцианин, 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирин IX, дигидрохлорид гематопорфирина Показано увеличение селективности разделения витаминов НА и В12 и чувствительности определения В12 в присутствии модификаторов в буферном растворе.
6 Найдены условия для разделения и количественного определения водорастворимых витаминов в условиях ВЭЖХ и КЗЭ в присутствии окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка, 3,8-ди(1-метоксиэтил) дейтеропорфирина IX и дигидрохлорида гематопорфирина. Проанализированы фармацевтические препараты. Полученные
результаты согласуются с паспортными данными анализируемых образцов.
7. Спектроскопически подтверждены взаимодействия в системе модификатор - витамин в растворе и на поверхности сорбента. Данные использованы при интерпретации удерживания витаминов в колонках и электрофоретического поведения в динамически модифицированном капилляре.
8. Анализ экспериментальных данных показал, что на селективность разделения сорбатов в ВЭЖХ и КЗЭ влияют взаимодействия одних и тех же типов.
Основные результаты работы изложены в следующих публикациях:
1. Жарикова B.C., Матусова С. М., Лобанова Т.М., Нестерова О.В. ВЭЖХ геминпептидов на неподвижной фазе с иммобилизованным окта-4,5-карбоксифтапоцианатом цинка. / Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2003» (секция химия). Москва. 2003. 15-18 апреля. С. 18.
2. Zharikova V.S., Matusova S.M., Brykina G.D., Pirogov A.V., Shpigun O.A., Zheltukhina G A. HPLC of the peptide derivatives of protohemine IX / Proceedings of the 3rd International Symposium on Separation in Biosciences -SBS 2003 «100 years of chromatography». Moscow. Russia. 2003. May 13-18. Moscow. 2003. P. 29.
3. Жарикова B.C., Матусова С. M., Брыкина Г.Д., Пирогов А В., Шпигун O.A., Желтухина Г.А. Исследование и использование в ВЭЖХ комплексов водорастворимых фталоцианинов с полиэлектролитами. / Материалы IX Международной конференции по химии порфиринов и их аналогов. Суздаль. 2003. 8-12 сентября. С. 255.
4. Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Пирогов A.B., Шпигун O.A. // Адсорбция окта-4, 5-карбоксифталоцианата цинка в присутствии полиэлектролита на сорбентах для ВЭЖХ. Вестн. МГУ. Сер.2. Химия. 2003. 44. №6. С.409-411.
5. Жарикова B.C., Матусова С.М. Spheron-СЮОО, модифицированный фталоцианинами, как неподвижная фаза в ВЭЖХ. / Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2004» (секция химия). Москва. 2004. 12-15 апреля. С. 12.
6. Жарикова B.C., Брыкина Г.Д., Пирогов A.B., Шпигун O.A., Павлов В.Ю. Разделение витаминов методом КЗЭ с использованием капилляра,
модифицированного производными порфирина. / Материалы Всероссийской конференции «Аналитика России», посвященной 100-летию со дня рождения академика И. П. Алимарина. Клязьма. 2004. 27 сентября-1 октября. С. 185.
7. Мочалова В С., Брыкина Г.Д., Минаева Л.И., Матусова С.М., Павлов В Ю., Рожманова Н.Б., Шпигун O.A. Водорастворимые порфирины как модификаторы в КЗЭ. VI Школы-конференции молодых ученых стран СНГ по химии порфиринов и родственных соединений. Санкт-Петербург 2005. 17-23 января. С. 125 8 Мочалова В С , Матусова С. М. Поведение водорастворимых витаминов на колонках, модифицированных порфиринами и фталоцианинами. I Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2005» (секция химия). Москва. 2005.12-15 апреля. С. 29 9. Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Матусова С M, Шпигун O.A. Хроматографические свойства сорбентов для ВЭЖХ, модифицированных окта-4,5-карбоксифталоцианатом цинка. II Журн. аналит химии. 2005 Т 60. №11. С 1170-1175 10 Мочалова В С , Брыкина Г.Д , Шпигун OA// ВЭЖХ водорастворимых витаминов на модифицированных сорбентах. Вестн МГУ. Сер 2 Химия 2006. Т.47. N8 3. С.140-Й5,
АМГ
»-2 945
Подписано к печати 24 01.06 Тираж 100 экз. Заказ № 12 Отпечатано в ООП МГУ
Список сокращений.
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Порфирины и фталоцианины как модификаторы в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе.
1.2. Определение водорастворимых витаминов методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярного электрофореза.
Глава 2. Исходные вещества, подвижные фазы, рабочие буферные растворы, сорбенты, методика работы, аппаратура, расчетные формулы.
Глава 3. Гетерогенизация порфиринов и фталоцианинов на сорбентах для высокоэффективной жидкостной хроматографии
3.1. Адсорбция из растворов на гидрофобизированных силикагелях и ионообменниках низкой емкости.
3.2. О механизмах адсорбции модификаторов.
Глава 4. Модифицированные сорбенты как неподвижные фазы в ВЭЖХ
4.1. Удерживание фенолов на гидрофобизированных силикагелях и ионообменниках на основе полиметакрилатной матрицы.
4.2. Поведение водорастворимых витаминов на ионообменниках на основе силикагеля и полиметакрилатных матриц.
4.3. Анализ фармацевтических препаратов.
Глава 5. Порфирины и фталоцианины как модификаторы в КЗЭ
5.1. Выбор оптимальных условий разделения водорастворимых витаминов (рН, концентрация буферного раствора).
5.2. Поведение витаминов в динамически модифицированном кварцевом капилляре.
5.3. Анализ фармацевтических препаратов.
ВЫВОДЫ.
Актуальность темы. В работе исследовано влияние водорастворимых порфиринов и фталоцианинов на селективность разделения в высокоэффективной жидкостной хроматографии и капиллярном электрофорезе. При постановке работы мы учитывали, что ВЭЖХ и КЭ дополняют друг друга, используются практически в одних и тех же областях науки и техники и для повышения селективности хроматографического и электрофоретического разделения применяются аналогичные приемы. Перспективно получение простыми методами новых адсорбентов на основе известных матриц для внедрения их в аналитическую практику.
В качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов нами использованы водорастворимые порфирины и фталоцианины, которые сравнительно мало изучены, однако, благодаря уникальности строения молекул способны к взаимодействиям с активными центрами поверхностей, сорбатами, полиэлектролитами, подвижными фазами, их состояние в растворе существенно зависит от рН.
В качестве сорбатов были выбраны, с одной стороны, хорошо изученные фенолы, как для уточнения механизма их сорбции на модифицированных сорбентах, так и для тестирования колонок; с другой стороны - водорастворимые витамины, проблема определения которых в объектах все еще актуальна ввиду сложности, недостаточной экспрессности и селективности существующих методик. Данных по удерживанию водорастворимых витаминов на модифицированных порфиринами и фталоцианинами колонках в литературе нет. Нет данных также по электрофоретическому поведению витаминов в кварцевых капиллярах при использовании рабочих буферных растворов, содержащих эти модификаторы.
Цель работы: исследование селективности хроматографического и электрофоретического разделения, на примере фенолов и водорастворимых витаминов, при использовании порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов.
Конкретные задачи исследования:
• изучить адсорбцию модификаторов в статических и динамических условиях, оценить устойчивость модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ
• рассмотреть механизмы закрепления модификаторов на поверхности сорбентов
• спектроскопически исследовать взаимодействия модификаторов с полиэлектролитом и водорастворимыми витаминами в растворах и на поверхности сорбента для интерпретации экспериментальных данных разработать методики получения модифицированных сорбентов за счет физической адсорбции
• сравнить селективность разделения сорбатов на модифицированных и немодифицированных колонках
• оценить воспроизводимость коэффициентов емкости на модифицированных колонках
• оценить селективность разделения витаминов в динамически модифицированных кварцевых капиллярах
Научная новизна. Получены новые адсорбенты путем физической иммобилизации порфиринов и фталоцианинов на сорбентах на основе различных матриц. Модифицировали Silasorb-Ci8, Diaspher-110-Cig, Diasorb-130-C,, Diasorb -130-C4, Diasorb -130-C,6, Spheron 100 (LC), Spheron С 1000, НЕМА S 1000 QL, Nucleosil SB в статических и динамических условиях. Адсорбцию проводили в присутствии полиэлектролита хлорида полидиаллилдиметиламмония. В условиях
ВЭЖХ на модифицированных сорбентах исследовано поведение ряда водорастворимых фенолов и витаминов. Данные по хроматографическому удерживанию сорбатов на Spheron С 1000 и Diaspher-110-Cis обработаны согласно моделям Скотта-Кучеры, Снайдера-Сочевинского. Рассчитаны изотермы адсорбции ряда витаминов из данных ВЭЖХ. Предложена теоретическая интерпретация полученных результатов, рассмотрены возможные механизмы удерживания модификаторов на сорбентах и сорбатов на модифицированных сорбентах.
Водорастворимые порфирины и фталоцианины предложены в качестве модификаторов для динамического модифицирования капилляра в капиллярном зонном электофорезе. Исследована зависимость скорости и направления электроосмотического потока, электрофоретической подвижности, селективности и эффективности разделения водорастворимых витаминов от природы и количества модификатора.
В динамически модифицированном капилляре показана возможность селективного разделения никотинамида и цианокобаламина, увеличение чувствительности определения цианокобаламина. В классическом капиллярном зонном электрофорезе названные витамины не разделяются.
Практическая значимость. Предложены простые методики получения новых адсорбентов на основе известных матриц. Представлены примеры разделения модельных смесей замещенных фенолов и водорастворимых витаминов. Возможно разделение пяти витаминов за 20 мин в изократическом режиме на модифицированном Nucleosil SB и шести витаминов за 15 мин на Diaspher-110-Cig. Выполнено разделение смеси никотинамида и цианокобаламина методом КЗЭ в присутствии модификаторов. Проанализированы фармацевтические препараты, содержащие водорастворимые витамины, на модифицированных сорбентах в условиях ВЭЖХ и в динамически модифицированных капиллярах методом КЗЭ. В препарате «Пентовит» определен витамин В]2.
На защиту выносятся:
• Результаты исследования адсорбции окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка и 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX в статических и динамических условиях, устойчивости модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ и механизмов закрепления модификаторов на поверхности сорбентов.
• Результаты спектроскопического исследования взаимодействия модификаторов с полиэлектролитом хлоридом полидиаллилдиметиламмония и водорастворимыми витаминами в растворах и на поверхности сорбента.
• Данные по изучению адсорбции водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ, расчету изотерм адсорбции и термодинамических параметров адсорбции.
• Выводы о применимости моделей Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского к описанию удерживания фенолов на Diaspher-1 lO-Cig и Spheron С 1000.
• Данные по разделению сорбатов на модифицированных и немодифицированных колонках, а также в динамически модифицированных окта-4,5-фталоцианином, дигидрохлоридом гематопорфирина, 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирином IX кварцевых капиллярах.
• Условия и результаты количественного определения водорастворимых витаминов в фармацевтических препаратах методами ВЭЖХ и КЗЭ.
• Выводы о селективности хроматографического и электрофоретического разделения фенолов и водорастворимых витаминов при использовании порфиринов и фталоцианинов в качестве модификаторов неподвижных фаз и буферных растворов.
Апробация работы. Результаты работы доложены на международных конференциях «Ломоносов-2003», «Ломоносов-2004», «Ломоносов-2005» (Москва, 2003, 2004, 2005), «100 years of chromatography» (Moscow, Russia, 2003), IX Международной конференции по химии порфиринов и их аналогов (Суздаль, Россия,
2003), всероссийских конференциях «Аналитика России» (Клязьма,
2004), VI Школе-конференции молодых ученых стран СНГ по химии порфиринов и родственных соединений (Санкт-Петербург, 2005).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи:
• Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Пирогов А.В., Шпигун О.А. // Адсорбция окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка в присутствии полиэлектролита на сорбентах для ВЭЖХ. Вестн. МГУ. Сер.2. Химия. 2003. 44. №6. С.409-411.
• Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Матусова С.М., Шпигун О.А. Хроматографические свойства сорбентов для ВЭЖХ, модифицированных окта-4,5-карбоксифталоцианатом цинка. // Журн. аналит. химии. 2005. Т.60. №11. С. 1170-1175.
• Мочалова B.C., Брыкина Г.Д., Шпигун О.А. // ВЭЖХ водорастворимых витаминов на модифицированных сорбентах. Вестн. МГУ. Сер.2. Химия. 2006. Т.47. № 3. С. 180-185 и 7 тезисов докладов.
Выводы
1. Методом ДО подтвержден физический характер адсорбции модификаторов окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка и 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX в присутствии полиэлектролита хлорида полидиаллилдиметиламмония на сорбентах для обращено-фазовой и ионообменной ВЭЖХ - Silasorb-Cis, Diaspher-110-Cis, Diasorb-130-Сь Diasorb- 130-C4, Diasorb-130-Ci6, Spheron 100 (LC), Spheron С 1000, НЕМА S 1000 QL, Nucleosil SB. Предложены методики получения модифицированных сорбентов. Показана устойчивость модифицированных сорбентов в условиях ВЭЖХ.
2. Спектрофотометрическим методом исследовано состояние окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка в растворе в присутствии полиэлектролитов. Предложены механизмы адсорбции окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка на гидрофобизированных силикагелях и катионообменниках на основе полиметакрилатной матрицы в присутствии полиэлектролита; 3,8-ди(1-метоксиэтил) дейтеропорфирина IX на анионообенниках на основе силикагеля и полиметакрилатной матрицы.
3. Найдены условия разделения семи фенолов на модифицированном НЕМА S 1000 QL и пяти фенолов на модифицированном Diaspher-110-Ci8. Порядок выхода фенолов соответствует увеличению их гидрофобности. Вытеснительные модели Скотта-Кучеры и Снайдера-Сочевинского для Diaspher-110-Cis адекватно описывают экспериментальные данные в диапазоне 8 -70 % полярной добавки подвижной фазы, для Spheron С 1000 в диапазоне 8 — 50% .
4. Найдены условия для разделения стандартной смеси 6 водорастворимых витаминов на модифицированном Diaspher-1 lO-Cjg в течение 15 мин и 5 витаминов на Nucleosil SB в течение 20 мин. Рассчитаны их изотермы адсорбции по методу Глюкауфа и некоторые термодинамические параметры адсорбции (ат, К, AG). Построены шкалы селективности.
5. Установлено, что для динамического модифицирования капилляра наиболее подходят окта-4,5-карбоксифталоцианин, 3,8-ди(1-метоксиэтил)дейтеропорфирина IX, дигидрохлорид гематопорфирин. Показано увеличение селективности разделения витаминов НА и В12 и чувствительности определения Bj2 в присутствии модификаторов в буферном растворе.
6. Найдены условия для разделения и количественного определения водорастворимых витаминов в условиях ВЭЖХ и КЗЭ в присутствии окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка, 3,8-ди(1-метоксиэтил) дейтеропорфирина IX и дигидрохлорида гематопорфирина. Проанализированы фармацевтические препараты. Полученные результаты согласуются с паспортными данными анализируемых образцов.
7. Спектроскопически подтверждены взаимодействия в системе модификатор - витамин в растворе и на поверхности сорбента. Данные использованы при интерпретации удерживания витаминов в колонках и электрофоретического поведения в динамически модифицированном капилляре.
8. Анализ экспериментальных данных показал, что на селективность разделения сорбатов в ВЭЖХ и КЗЭ влияют взаимодействия одних и тех же типов.
1. Уварова М.И., Брыкина Г. Д., Шпигун О.А. Порфирины и фталоцианины в ВЭЖХ (обзор). // Журн. аналит. химии. 2000. Т.55. С.1014-1024.
2. Брыкина Г.Д., Матусова С.М., Шпигун О.А. и др. Обращенно-фазовая ВЭЖХ геминпептидов на сорбенте, модифицированном цинк-окта-4,5-карбоксифталоцианином. // Журн. аналит. химии. 2004. Т.59. С.301-306.
3. Tomankova Z., Matjka P., Sykora D., Krai V. Interaction of oligopyrrole macrocycles with aromatic asids: spectroscopical, quantum chemical and chromatographic aspects. // Talanta. 2003. V.59. P.817-823.
4. Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Пирогов A.B., Шпигун О.А. Адсорбция окта-4,5-карбоксифталоцианата цинка в присутствии полиэлектролита на сорбентах для высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Вестн. Моск. ун-та. Сер.2. Химия. 2003. Т. 44. С.409-411.
5. Mifune М., Shimonura Y., Saito Y. et al. High-performance liquid chromatography stationary phases based on tl-tl — electron interaction. Aminopropyl silica gels modified with metal phthalocyanines. // Bull. Chem. Soc. Jpn. 1998. V.71. P.1825-1830.
6. Mifune M., Kanai Т., Urabe M. et al. Separation characteristics of aminopropyl silica gels modified with copper-phthalocyanine as high-performance liquid chromatography stationary phases. // Anal. Sci. 1999. V.15. P. 581-587.
7. Kibbey C.E., Meyerhoff M.E. Preparation and characterization of covalently bound tetraphenylporhhyrin-silica gel stationary phases for reversed-phase and anion-exchange chromatography. // Anal. Chem. 1993. V.65. P.2189-2194.
8. Брыкина Г.Д., Жарикова B.C., Матусова C.M., Шпигун O.A. Хроматографические свойства сорбентов для ВЭЖХ, модифицированных окта-4,5-карбоксифталоцианатом цинка. // Журн. аналит. химии. 2005. Т.60. №11. С.1170-1175.
9. Борисенкова С.А., Гиренко Е.Г. Успехи химии порфиринов. Т. 1/ Под ред. О.А. Голубчикова С-Пб: НИИ Химии СпбГУ, 1997. 384 с.
10. Основы аналитической химии. Коллектив авторов. В 2-х кн. Кн. 1. Общие вопросы. Методы разделения. М: Высшая школа, 2004. С. 342.
11. Руководство по капиллярному электрофорезу / Под ред. A.M. Волощука. М.: РАН. 1996.231 с.
12. Бекасова О.Д., Бреховских А.А., Брыкина Г.Д. и др. R-фикоэритрин как природный лиганд для детоксикации ионов кадмия и туннельная матрица для синтеза наночастиц сульфида кадмия. // Прикладная биохимия и микробиология. 2005. Т.41. С. 308-314.
13. Xu D-K., Lin Н., Chen H-Y. Amperometric detection of enzymes in capillary zone electrophoresis based on dynamic modification with surfactants. // Anal. Chim. Acta. 1997. V. 349. P. 215-219.
14. Li W., Zhong Y., Lin В., Su Z. Characterzation of polyethylene glycol-modified proteins by semi-aqueous capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 905. P. 299-307.
15. Fotsing L., Fillet M., Chiap P., Hubert P., Crommen J. Elimination of adsorption effects in the analysis of water-soluble vitamins in pharmaceutical formulations by capillary electrophoresis. // J. Chrom. A. 1999. V. 853. P. 391-401.
16. Beale S.C. Capillary Electrophoresis. // Anal. Chem. 1998. V. 70. P. 279 -300.
17. Britz-Mckibbin P., Chen D. A Water-soluble tetraethylsulfonate derivative of 2-methylresorcinarene as an additive for capillary electrophoresis. //Anal. Chem. 1998. V. 70. P. 907- 912.
18. Bachmann K., Bazzanella A., Haag I., Han K.-Y., Arnecke R., Bohmer V., Vogt W. Resorcarenes as pseudostationary phases with selectivity for electrokinetic chromatography. // Anal. Chem. 1995. V. 67. P. 1722 -1726.
19. Biesaga M., Pyrzynska K., Trojanowicz M. Porphyrins in analytical chemistry. A review. // Talanta. 2000. V. 51. P. 209 224.
20. Charvatova J., Kastfka V., Krai V., Deyl Z. Capillary electrochromatographic study of interactions of porhyrin derivatives with amino acids and oligopeptides. // J. Chromatogr. B. 2002. V. 770. P. 165 -175.
21. Charvatova J., Kasicka V., Deyl Z.} Krai V. Influencing electroosmotic flow and selectivity in open tubular electrochromatoghraphy by tetrakis(pentafluorophenyl)porphyrin as capillary wall modifier // J. Chromatogr. A. 2003. V. 990. P. 111 119.
22. Charvatova J., Matejka P., Krai V., Deyl Z. Open-tubular electrochromatography of organic phosphates on a sapphyrin-modified capillary. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 921. P. 99 107.
23. Charvatova J., Deyl Z., Kasicka V., Krai V. Open-tubular electrochromatography of underivatized amino acids using Rh(III) tetrakis(phenoxyphenyl)porphyrin as capillary wall modifier // J. Chromatogr. A. 2003. V. 990. P. 159 167.
24. Charvatova J., Krai V., Deyl Z. Capillary electrochromatographic separation of aromatic amino acids possessing peptides using porphyrin derivatives as the inner wall modifiers. // J. Chromatogr. B. 2002. V. 770. P. 155-163.
25. Xiao J., Meyerhoff M. Retention behavior of amino acids and peptides on protoporphyrin-silica stationary phases with varying metal ion center. // Anal. Chem. 1996. V. 68. P. 2818 2825.
26. Bushan R, Meenakshi A. Separation of vitamin В complex and folic acid by HPLC normal phase and reversed phase TLC. // Nat. Acad. Sci. Lett. 2002. V.25. P.159. Цит. по РЖХим. 2004, 15Б2.522.
27. Cheong W.J., Ко J.H., Cho C.M. Simultaneous determination of water-soluble vitamins excreted in human urine after overdose of vitamin pills by a HPLC method coupled with a solid phase extaraction. // Talanta. 2000. V.51. P.799-805.
28. Gizawy S.M., Ahmed A.N. High performance liquid chromatographic determination of multivitamin preparation using a chemically bonded cyclodextrin stationary phase. // Anal. Lett. 1991. V.24. P.l 173-1179.
29. Ying L., Phyllis R. The optimization of HPLC-UV conditions for use with FTIR detection in the analysis of В vitamins. // J. Liq. Chromatogr. & Relat. Technol. V. 26. P. 1769. Цит. по РЖХим. 2003,22Г.212.
30. Wongyai S. Determination of vitamin В12 in multivitamin tablets by multimode HPLC. //J. Chromatogr. A. 2000. V.870. P.217-222.
31. Кожанова JI.A., Федорова Г.А., Барам Г.И. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в поливитаминных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. аналит. химии 2002. Т.57. С.49-53.
32. Moreno P., Salvado V. Determination of eight water- and fat-soluble vitamins in multi-vitamin pharmatceutical formulations by high-perfomens liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 2000. V.870. P.207-212.
33. Chan M.C., Joung H.K, Won J.C. Simultaneous dermination of water-soluble vitamins excreted in human urine after eating an ovardose of vitamin pills by a HPLC method coupled with a solid phase extraction. // Talanta. 2000. P.799-806
34. Klejdus В., Petrova J., Potesil D. and oth. Simultaneous dermination of water- and fat-soluble vitamins in pharmatceutical preparations by HPLC coupled with diode array detection. // Anal. Chim. Acta. 2004. V.520. P.57-62.
35. Heudi O., Kilinc Т., Fontannaz P. Separation of water-soluble vitamins by reversed-phase HPLC with UV-detection: Application to polyvitaminated premixes. //J. Chromatogr. A. 2005. V.1070. P.49-54.
36. Vinas P., Lopez-Erroz C., Balsalobre N.,Hernandez-Cordoba M. Reversed-phase liquid chromatography on an amide stationary phase ferthe determination of the В group vitamins in baby foods. // J. Chromatogr. A. 2003. V.1007. P.77-83.
37. Филимонов B.H, Колосова И.Ф., Балятинская Л.Н. Хроматографическое поведение водорастворимых витаминов. // Журн. аналит. химии. 1991. Т.46. С.758-762.
38. Ghorbani A., Momenbeik F., Khorasani J., Simultaneous micellar liquid chromatographic analysis of seven water-soluble vitamins: optimization using super-modified simplex. // Anal. Bioanal. Chem. 2004. V.379. P.439-443.
39. Староверов B.M., Дейнека В.И., Григорьев A.M. и др. ВЭЖХ-анализ водорастворимых витаминов в составе поливитаминного сиропа «Олиговит». // Хим.-фарм. журн. 2004. Т.38. С.54-60.
40. Рухадзе М.Д., Безарашвили Г.С., Филимонов В.Н. Оптимизация разделения смеси витаминов группы В симплекс-методом в субмицеллярной хроматографии. // Журн. физ. химии 2002. Т.76. С.521-526.
41. Рухадзе М.Д., Безарашвили Г.С., Сидамонидзе Ш.И. Оптимизация хроматографического разделения смеси витаминов группы В симплекс-методом. // Журн. физ. химии 1999. Т.73. С.223 7-2240.
42. Лутцева А.И., Маслов Л.Г. Методы контроля и стандартизации лекарственных препаратов, содержащих водорастворимые витамины. //Хим.-фарм. журн. 1999. Т.ЗЗ. С.30-37.
43. Cao Z., Ding X., Ye J. Determinations of water-soluble vitamins in multivitamin tablets be capillary electrophoresis with electrochemical detection. // Fenxi-Ceshi-Xuebao. 1999. V. 18. P. 57-59.
44. Fotsing L., Fillet M., Chiap P., Hubert P., Crommen J. Elimination of adsorption effects in the analysis of water-soluble vitamins in pharmaceutical formulations by capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 853. P. 391-401.
45. Panak K.C., Giorgieri S.A., Ruiz O.A., Diaz L.E. Postharvest analysis of vitamin С and inorganic cations in lettuce by capillary zone electrophoreses. // J. Cap. Electrophoresis. 1998. V. 5. P. 59-63.
46. Zhang Z., Chen X., Hu Z. Determination of three water-soluble active ingredients in Quangli Yingqiao containing vitamin С tablets by capillary zone electrophoresis. // J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 1997. V. 20. P. 3245-3255.
47. Fotsing L., Fillet M., Bechet I. Determination of six water-soluble vitamins in pharmaceutical formulation by capillary electrophoresis. // J. Pharm. Biomed. Anal. 1997. V. 15. P. 1113-1123.
48. Shiewe J., Mrestani Y. Application and optimization of capillary zone electrophoresis in vitamin analisis. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 717. P. 255-259.
49. Boonkerd S., Detaevernier M. R., Michotte Y. Use of capillary electrophoresis for the determination of vitamins of the В group in pharmaceutical preparations. // J. Chromatogr. A. 1994. V. 670. P. 209-214.
50. Jegle U. Separation of water-soluble vitamins via capillary zone electrophoresis. //J. Chromatogr. A. 1993. V. 652. P. 495-501.
51. Huopalahti R., Sunell J. Use of capillary zone electrophoresis in the determination of Вб vitamins in pharmaceutical products. // J. Chromatogr. A. 1993. V. 636. P. 133-135.
52. Horie H., Mukai Т., Kohata K. Simultaneous determination of qualitatively important components in green tea infusions using capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 758. P. 332-335.
53. Terabe S., Otsuka K., Ichikawa K. et al. Electrokinetic separations with micellar solutions and open-tubular capillaries. // Anal. Chem. 1984. V. 56. P. 111-113.
54. Mukai Т., Kohata K. Simultaneous analysis of water-soluble vitamins using capillary electrophoresis. // HP Appl. Notes. 1994. P. 4.
55. Kibbey E., Meyerhoff M.E. Micellar electrokinetic chromatographic analysis of water-soluble vitamins and multi-vitamins integrators. // Electrophoresis. 1994. V. 15. P. 1147-1150.
56. Lin Z., Gao. H. Determination of nicotinamide and vitamin Вб by micellar electrokinetic capillary chromatography. //Yaowu-Fenxi-Zazhi. 1998. V. 22. P. 273-276.
57. Gomis D.B., Gonzalez L.L., Gutidrrez-Alvarez D. Micellar electrokinetic capillary chromatography analysis of water-soluble vitamins. // Anal. Chim. Acta. 1999. V. 396. P.55-60.
58. Fujiwara S., Iwase S., Honda S. Analysis of water-soluble vitamins by micellar electrokinetic capillary chromatography. // J. Chromatogr. 1988. V. 447. P. 133-140.
59. Garcia L., Blazquez S., San Andres M.P., Vera S. Determination of thiamine, riboflavin and pyridoxine in pharmaceuticals by synchronous fluorescence spectrometry in organized media. // Anal. Chim. Acta. 2001. V. 434. P. 193-199.
60. Yik Y.F., Lee H.K., Li S.F.Y., Khoo S.B. Micellar electrokinetic capillary chromatography of vitamin Вб with electrochemical detection. // J. Chromatogr. 1991. V. 585. P. 139-144.
61. Olsson J., Nordstrom O., Nordstrom A.-C., Karlberg B. Determination of ascorbic acid in isolated pea plant cells by capillary electrophoresis and amperometric detection. Hi. Chromatogr. A. 1998. V. 826. P. 227-233.
62. Досон P., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика. М.: Мир. 1991.544 с.
63. Практические работы по адсорбции и газовой хроматографии / Под ред. А. В. Киселёва. М.: МГУ, 1968. 285 с.
64. Чудук Н.А., Эльтеков Ю.А. Адсорбция кислородосодержащих ароматических соединений в н-гептане кремнеземом. // Журн. физ. химии. 1981. Т. 55. С.1010-1015.
65. Успехи химии порфиринов. Т. 2 / Под ред. О.А. Голубчикова. С-Пб: НИИ Химии СпбГУ, 1997. 336 с.
66. Амин Н.Х., Некрасова Л.И., Борисенкова С.А. Адсорбция фталоцианина кобальта на силохроме и спектральные свойства поверхностных слоев. // Журн. физ. химии. 1979. Т. 53. С.2071-2074.
67. Tabata К., Fukushima К., Oda К., Okura I. Selective aggregation of zinc phthalocyanines in the skin. // J. Porphyrins Phthalocyanines. 2000. V.4. P. 278-284.
68. Мамлеева H.A. Моделирование межмолекулярных взаимодействий хлорофилла in vivo в системах с адсорбционно-иммобилизованным пигментом. // Журн. физ. химии. 1990. Т. 64. С. 593-609.
69. Борисенкова С.А. Адсорбционные фталоцианиновые катализаоры . Методы получения, структура слоя, каталитическая активность. // Вестн. Моск. ун-та. Сер.2. Химия. 1984. Т. 25. С.427-438.
70. Лабораторное руководство по хроматографии и смежным методам. В 2-х т. Т. 1. / Под ред. В.Г. Березкина. М: Мир, 1982. С. 63.
71. К. Stulik, V. Pacakova, J. Suchankova, H. Claessens // Stationary phases for peptide analysis by HPLC: a review. Anal. Chim. Acta. 1997. V.352. P. 119.
72. Мамлеева Н.А., Некрасов Л.И. Влияние растворителя на межмолекулярные взаимодействия хлорофилла и феофитина в адсорбированном состоянии. // Журн. физ. химии. 1989. Т. 63. С. 735-741.
73. Camp P.J., Jones А.С., Neely R.K., Speirs N.M. Aggregation of copper(II) tetrasulfonated phthalocyanine in aqueous salt solutions. // J. Phys. Chem A. 2002. V.106. P. 10725-10732.
74. Shutte W.J., Sluyters-Rehbach M., Sluyters J.H. Aggregation of an octasubstituted phthalocyanine in dodecane solutions. // J. Phys. Chem. 1993. V.97. P.6069-6073.
75. Празова И.В., Мамлеева H.A., Борисенкова C.A. Адсорбционные слои карбоксипроизводного фталоцианина кобальта на поверхностях различного типа. //Журн. физ. химии. 1991. Т.65. С. 1878-1885.
76. Березин Б.Д., Ениколопян Н.С. Металлопорфирины. М.: Наука, 1988. 160 с.
77. Schipper Е., Heuts J., Pickaers R. et al. Role of polycation promoters in the cobalt(II) phthalocyaninetetracarboxylic and -octacarboxylic acid-catalyzed autoxidation of mercaptoethanol. // J. Polymer Science A. 1995. V.33. P.1841-1848.
78. Березин Б.Д. Координационные соединения порфиринов и фталоцианинов. М.: Наука, 1978. 274 с.
79. Успехи химии порфиринов. Т. 3 / Под ред. О.А. Голубчикова. С-Пб: НИИ Химии СпбГУ, 1997. 358 с.
80. Дворкин В.И., Горбунов Ю.Г., Жилов В.И. и др. Тетра-15-краун-5-фталоцианат кобальта как реагент для спектрофотометрического определения калия и натрия в среде хлороформ-этанол-вода. // Журн. аналит. химии. 2002. Т.57. С.661-665.
81. Kumar G.A., Thomas J., Unnikrishnan N.V. et al. Optical absorption and emission spectral studies of phthalocyanine molecules in DMF. // J. Porphyrins Phthalocyanines. 2001. V.5. P. 456-459.
82. Булатов М.И., Калинкин И.П. Практическое руководство по фотоколориметрическим и спектрофотометрическим методам анализа. С-Пб: Химия, 1972. 407 с.
83. Комлева И.Л., Митрофанова А.Н., Некрасова Л.И. Адсорбционные слои хлорофилла и феофитина на аминированной поверхности кремнезема. //Журн. физ. химии. 1987. Т.61. С.2754-2758.
84. Modern chromatography analysis of vitamins. / Edited by Leenhereer A.P., Lambert W.E., Bocxlaer L.F. New York: Marcel Dekker, Inc. 2000. 632p.
85. Рубан В.Ф., Беленький Б.Г. Определение фенолов в водных растворах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на микроколонках. // Журн. аналит. химии. 1988. Т.63. С.1307-1312.
86. Белямова Т.Т., Коренман Я.И., Фокин В.Н., Яшин Я.И. Жидкостная хроматография фенола с электрохимическим детектированием. // Журн. физ. химии. 1994. Т.68. С. 1877-1879.
87. Коренман Я.И. Экстракция фенолов. Горький: Волго-вятское книжное изд-во. 1973. 207с.
88. Родионов В.И., Верповский Н.С., Назаренко В.В. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография моно-, ди- и трициклогесилфенолов. // Журн. аналит. химии. 1988. Т.63. С.507-600.
89. ЮЗ.Ланин С.Н., Никитин Ю.С., Сыроватская Е.В. Адсорбция изомеров нитрофенола из трехкомпонентных растворов на гидроксилированном силикагеле. // Журн. физ. химии. 1993. Т.67. С.1658-1664.
90. Chee К.К., Lan W.G., Wong М.К., Lee H.K. Optimization of liquid chromatographic parameters for the separation of priority phenols by using mixed-level orthogonal array design. // Anal. Chim. Acta. 1996. V.312. P.271-280.
91. Ланин С.И., Лигаев А.И., Никитин Ю.С. Определение фенолов в водных растворах высокоэффективной жидкостной хроматографией. //Журн. аналит. химии. 1986. Т.61. С. 1411-1417.
92. Юб.Ланин С.Н., Ланина Н.А., Никитин Ю.С. Влияние ассоциации молекул сорбата и модификатора в подвижной фазе на удерживание в высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. физ. химии. 1995. Т.69. С.2045-2051.
93. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии / Под ред. Хеншена А., Хупе К.-П., Лотшпайха Ф., Вельтера В. М.: Мир, 1988. 688 с
94. Парфит Г. , Рочестер К. Адсорбция из растворов на поверхностях твердых тел. М.: Мир, 1986. 488 с.
95. Mayer В. X. How to increase precision in capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 907. P. 21-37.
96. Руденко Б.А., Руденко Г.И. Высокоэффективные хроматографические процессы. М.: Изд-во РАН. 2002. 254 с.
97. Weldon М.К., Arlington С.М., Runnels P.L., Wheeler J.F. Selectivity enhancement for free zone capillary electrophoresis using conventional ion-pairing agents as complexing additives. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 758. P. 293-302.
98. Altria K.D., Kelly M.A., Clare B.J. Current applications in the analysis of pharmaceuticals by capillary electrophoresis. // Trends in analytical chemistry. 1998. V.17. P.214-226.