Выделение и характеристика брадикинин-потенцирующих пептидов из яда паука LATRODECTUS TREDECIMGUTTATUS тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

АКАДЕМИЯ НАУК УЗБЕКСКОЙ ССР

ИНСТИТУТ ЕИСЮРГАНИЧЕСКОЙ химии им. академика А.С.САДИКОВА

На правах рукописи

СОСНЙНА НАДЕЭДД АЛЕКСАНДРОВНА УДК 547.993

ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА БРАдаКИНИН-ПОТЕНЦИРУИЩ ПЕПТИДОВ ИЗ ЯДА ПАУКА ' ЬАТясшЕстиэ тяЕПЕстмаитатиа

Специальность 02.00.10 - биоорганичеекая химия, химия природных и физиологически активных веде см

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ташкент - 1990

Работа выполнена в Институте биоорганической химии им. академика А.С.Сапунова АН УзССР

Научный руководитель? доктор биологических наук

АХУНОВ А.А.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук ГАШЬГАНС А.И.

профессор

доктор химических наук , ЛЕОНТЬЕВ В.В.

Ведущая организация: Институт биологической и медицинской химии АМН СССР - ,

Защита состоится

на заседании специализированного Собета Д 015.21.01 Института биоорганической химии АН УзССР по адресу : 700143, г. Ташкент, Проспект М.Горького, 83

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биоорганической химии им. академика А.С.Сацыкова АН УзССР

Автореферат разослан

а? / " 1990 г.

УЧЕНЫЙ СЕКРЕТАРЬ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННОГО СОВЕТА

кандидат'химических наук МУХАМЕДХАНОВА С.И

СЬ часов

Актуальность проблемы . В последние годы проводятся интенсивные структурно-функциональные исследования веществ, способных усиливать и пролонгировать биологические эффекты брацикинина (Ш>. Это связано с участием калликреин-кининовой систеш (ККС) в регуляции уровня артериального давления (АД), тонуса сосудов» а такхса с ключевой рояьэ одного из основных кштнразрушаюцих ферментов - ккшшази II - в метаболизме на только кининов, но и ангкотензинов. В связи с этим возникла необходимость получения избирательных ингибиторов фермента с цельп создания нового типа антигипертензивны* препаратов.

Работа с природными и синтетическими брадикшпэд-потениррупгр-т пептидами (ШП) - ингибиторами ккншазы II - показа®! перспективность этих исследований в поиске но виз биологически активная веществ, снижающих артериальное давление. Наибольший интерес среда таких соединений представляют пептиды, выделеннпэ ез ядов змей и насекомых. Однако молекулярный механизм потенцирующего действия на брадиккнин до конца еще на ясен.

Этим обусловлена необходимость широкого поиска брадикинин-потенцирувщих пептидов из различных источников, в частности ядоа пиэотнш:, отличающихся большим содерзанием биологически активных веществ. Получение и» а индивидуальном состоянии, установление хшнческого строения и механизма действия в совокупности определяет актуальность настоящих исследований, направленных на выдежениё пептидов, потеяг?!рувщш: брадткзшн из яда паука ьа-ьго-

(1ес1;и8 1;геаесп.таи«а1;из В ГОМОГЕННОМ ВНДЗ И ЙЗуЧЗНИО НЭКОТОрШС

еспзягов мехатина кх действия,

еадачц пссделов.чнкА. Оеногная цзль напшс исследований - иденяфжацзя я прзпаративкоа сыдолейга врадакшш-аотен-ГСЯРУВЩГОС пептидов из яда паука Ьа-ЬгоАесЬиз гг«аеи1гя£иии1.из

ваяснение механизма гас действия.

Для достигения поставленной цели решались следуицие ездзчм:

- определение брадикинии-потенцирувцей акзяшносет в яд© и со фракциях, выделенных на яда паука каракурта}

- разработка г»зтода псцучоиая шсоксочз^гглшг брадгяглкш-потенцврующих пептидов из яда;

- определение фиэико-гзашческих свойств етих пептидов: ао-аекулярная масса, изоэлектрическая точка, аминокислотный состав, концевые аминокислотные последовательности)

- характеристика биологического действия выделенных пептидов}

- установление механизма потенцирования Срацикиника пептидами ИЗ яда паука Ьа1;го<1ес1;иэ 1;гес1ес1п^и«а1;из.

Научная новизна и практическая значимость. Впервые выделены в гомогенно« виде два брад:кишЕЫю?£Н1?1ругдих пептида из яда паука каракурта с молекулярной ¿лесой 10 ООО л 2500 Д. Показано, что они являются эффективными ингибиторами кининразрушающих ферментов, снижают артериальное давление, что дзет возможность рассматривать шс в качестве потендаальшзс терапевтических средств.

Изучены фиэико-зошическке свойства и биологическое действие пептидов ко да . Установлено, что пзпэтзду т яда паука усиливают и пролонгирует спаоиогенниЯ и депреегоргай еф|екты брадикинкна, сткиуляруиг шовобоадсиие гисгаака » «згтаах вяэ-5ок, скккам прессорный эффект внгиотензкна 2. Тем сезам расширен арсенал брадикитш-потетдеруЕгдах пептидов с широхез спект-рои действия для бяоятачосггиг исследований при иоучекаэ компонентов каллккренн-киннновой п ро*ш-онглотснэ5ш-альдосу©роновой систем (РААС) организма.

Брадикигаш-потенцируюаргс пептиды иэ яда паука Ъа-Ьгойес-

tua tredeciraguttatus используются во Всесоюзном химико-фармаце-вткческоы институте им. С.Орджоникидзе в процессе поиска и изучения новых антигипортензивных препаратов, а также в Институте биологической н медицинской химии АМН СССР как "инструмент" щы изучении свойств и функций компонентов калликреин-кининовой и решш-ангнотензин-адьдостероновой систем организма млекопитающих,

Публикации и апробация результатов исследований. Основные положения диссертационной работа были представлены на 1У Всесоюзном съезде фармакологов в г. Ташкенте (1988 г), на I региональном совещании по химическим реактивам республик Средней Азии и Казахстана, г. Душанбе (1986 г), на конференции молодых ученых "Актуальные проблемы укрепления связи науки и производства", г. Фергана (1988 г), на Всесоюзном симпозиуме по химии белков, г. Тбилиси (1990 г). По полупенным результатам опубликовано 6 статей.

Структура и объем работе. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 204 наименования, из них 145 зарубежных авторов. Работа содержит 8 таблиц и 33 рисунка.

МАТЕРИАЛЫ И ШВДИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследования являлся яд гэука каракурта, полученный из Среднеазиатского зоокомбината.

Присутствие в яде отдельных компонентов калликреин-кинино-вой системы исследовали методами, описанными Т.С.Пасхиной и др. (1968 г).

Гель-фильтрация на сефадексах и хроматографию на ионооб-ыенниках проводили в соответствии с рекомендациями фирм-изготовителей. Электрофорез в градиенте ПМГ выполняли по методике Хошимото ( !io3iunoto » 1983 г) с импольэоваяием приборов и реактивов фирмы " Hoaual (Венгрия), а изоэлектрофоку-сирование осуществлили на аппарате " MultipUorи (ЛКБ,Швеция) по методу Карлсона ( Kiriujo 1, 1973 г). Определение молекулярной массы осуществляли двумя методами: с помощью гель-хроматографии в колоночном варианте (Г.Д.Остерман, 1970 г) и методом электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия ( Heber , ОзЬогп , 1969 г).

Аминокислотный состав брадикинин-потенцирующих пептидов определяли на"автоматическом анализаторе Durrmn Д-500,(США). .

Для определения свободных сульфгидрильных групп использовали метод Эллмана ( fiiiraon , 1959 г) в модификации Ве-ревкиной и _цр. (1976 г).

Активность карбоксипептидазы н . в сыворотке крови человека определяли по скорости гидролиза гиппурил- L -лизина спек-трофотометрическим методом Фолька и др. ( Polk , 1959 г), модифицированного Т.С.Пасхиной с соавт. (1968 г). Высвобождение гистамина из тучных клеток при действии Ш определяли по метопу Дконсона ( Q.il.Jonaon , 1973 г). Выделение субклеточных фракций из гладкомышечной ткани проводили по схеме, предложенной Кидвеем (Kidwai , 1976 г), модифицированной Г.А.Попковой с соавт. (1979 г).

Для выяснения характера действия пептидов из яда паука на гладхомцшечную ткань применяли метод накопительных кривых (Комиссаров, 1965 г)..

РЕЗУЛЬТАТУ И ИХ ОБСУЭДЕНИЕ

ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА НРДЩВДШН-ПОТЕНЦИЕШр:

ПЕПТИДОВ ИЗ ЯДА ПАУКА КАРАКУРТА

Препаративное разделение цельного яда паука ьоггойесию ■ЬгеаесЗ-теииаиш осуществляли на коленке с гидрофильным гелем Т5К-Н "<■ -55 Р . В предварительных опытах с использованием 0,05 М трис-НС1 буфера ■ с различными значениями рН было показано, что оптимальное разделение происходит при рН 7,0-8,0. Учитывая это, сорбция проводили в 0,05 Ы трис-НС1 буфере, рН 8,0, елюкруя тем же буфером. При этом цельный яд удалось разделить на 6 фракций (рис. I)

В результате тестирования во фракциях 3 и 4 обнаружена бра-дикинин-потенцкрукяцая активность, во фракция I - кининазная. Фракции, соответствующие этим"пшам", собирали, лиофилизирова-ли и хроматографнроваля каждую в отдельности. Для выбора условий разделения и типа носителя проводили аналитическое нзофо-кусированиэ каждой фракции в отдельности.

Установлено, что во фракциях, обладающих брадикинин-потен-шрующей активностью, содержатся компоненты с кислыми значениями Р1 (рис. 2)

Следующий этап очистки фракции 3 - ионообменная хроматография на колонке (1,3x8 см) Т>:К-ДЕАЕ в 0,05 М трис-НС1 буфере в линейном градиенте концентраций ИаС1 от 0,05 до 0,2 И (рис.3).

Фракцию 4 подвергали очистке на "ПК-ДЕЛЕ с использованием ступенчатого элвирования в.0,05 М трис-НС1 буфере, рН 8,0, в градиенте наС1 0,1; 0,15; 0,2 М (рис. 4).

ОйсссолнееГнио активных фракций проводили на колонке (1,3зз60 см) сефадекса ® -10, олюкруя аммиачной водой, скорость <ш>ции 33 »л/ч.

2,0 . 1,5

1,0 0,5

, . 1.5 Ж 5Я » 90

гнс. I Лроматографнческоо разделение цельного яда паука

Ь^гойесгиз Ъгедес1гавц«а1;иа «О КОЯОНКО <1,3x160 см) ТзК-Н V -55р в 0,05 М трис-НС1 буфере, рН 8,0. Скорость элтзцин 70 мл/ч. Объем каждой пробирки 10 мя, т- кгапшазная активность} сг^з- браднкянин-по-тенцируицая активность. 1-6 - фракции, обьядиченни* согласно "пиком".

..по.оси абсписс .-.номера, пробирок.

10,65

8,50

5,9

4,4

3,5

!

5,9 3,7

]

5,9 3,5

Рис. 2 Протеиногракка при адоэлектрофокусироеании фракций, обладающих биологической активностью, с градиентом амфолинов в интервале рН 3,5-9,5. А - стандарт} Б - фракция 3} В - фракция 4.

номера пробирок

Рис. 3 Ионообменная хроматография фракции 3 на колонке ЦБК-ДЕЛЕ, уравновешенной 0,05 М трис-НС1 буфером, рН 8,0, в градиента концентрации наС1 0,05-0,2 М, Скорость элюции 33 ил/ч

- фракция, обладающая брацикинин-потенцируа-цзй активность».

Ркс. 4 Ионсобмонпая хроиагогрзфкл фрягтцгш 4 на вогонав ТзК-ДОЕ в 0,05 Н трнс-Ш бу$зрэ, рН 8,0, в градиенте наМ. I - активная фрзяцгм.

- Разделение яда оказалось достаточно четким, однако електрофо;-ретический аналив свидетельствовал о гетерогенности фракций, в связи с чек дальнейшую очистку юс проводили, используя еысоко-вффективнув жидкостную хроматографию,

Очистку фракций 3-2 проводили на колонке (7,5x600 мм) uitroPao о -2000 s'.v при умеренном давлении, используя в качестве елюанга 0,6 % ацетонитрилфторацетатный буфер, рН 6,5, Потенцирующие вещества выходили с фракцией на 19 пин (рис, 5).

Фракции 4-1 хроыатографировали на колонке (1,6x155 ш) uitrosphere Cjg с обращенной фазой на хроматографе при высоком давлении, элюируя 0,1$ аыионийфторацетатныц буфером.(рис. 6). Обе фракции элюировались с колонки в виде одного сишетричного пика при повторной хроматографии в тех же условиях.

При хроыатографировании в тонком слое силикагеля кавдая фракция давала одно пятно при окраске нингидрином. Выделенные пептиды были обозначены как HIIIj (Rf 0,Й5) « BMIg ( % 0,43), Таким образом, используя различные методы колоночной хроматографии ИВ яда паука Latrodectua tredecimguttatus получены гомогенные брадикинин-потенцирующие пептиды, проявляющие ярко-выраженную брадикинин-погенцирующу» активность. Биологически активные фракции лиофильно высушивали и хранили йри температуре 4® С.

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И АМИНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ Bnnx и HlILj ИЗ ЯДА ПАУКА КАРАКУРТА

Полученная единственная полоса на электрофореграыме для

брадикинин-потенцирумцих пептидов (рис. 7)позволяет говорить

о высокой чистоте препаратов с молекулярной массой 10 ОООí 200

для Hfflj и £500*300 Д для ШП2 (рис. 8).

Рис. 5 Высокоэффективная жидкостная хроматография фракции 3-2 при умеренном давлении на колонне (7,5x600 ш) ШгоРас а - 2000 317. Эявант - 0,55? ацеуонитрил-фторацетатный буфер. Скорость эяищт 3 мл/ч.

Рис. 6 Обратнофозиая хроматография при высоком давлении фракции 4-1. Скорость олиции 0,7 мл/мин (стрелкой обозначена активная фракция).

г |

! ;

Я л'

' ?

М-...1

Рис. 7 Диск-электрофорез фракции 3-2 (А) и 4-1 (Б) из яда паука каракурта.

Условия: линейный градиент ПААГ от 10 до 24,5$ трис-глициновый буфер, рН 8,3, продолжительность электрофореза 4-5 ч при силе тока 17 мА.

ъ

Яг

б 5 . 4 3 2 -I -

~т— 10

га

Рис. 8 Определение молекулярной массы ШП^ и Б11П,, из яда паука каракурта методом электрофореза в МАГ в присутствии/ДО-N а; бромциановый годролизпт ммогло-бииа С I - 8200; 2 - 6200; 3 - 2500 Д); 4 - КС;

в - БПП1;

еж,.

А

Изоэлектрическо© фокусирование на пластинках полкакриля-мидного геля с амфолином в интервале рН 3,5-9,5 показало, что изоэлектрическая точка БПП^ равна 4,7^0,3, БПП^ - 3,5^,2.

Дополнителышо данные о гомогенности выделенных пептидов получены при анализе и-концевых аминокислотных остатков. Установлено, что имеет'и -концевую глутаминовую кислоту, а ШПг, - глицин.

Согласно данным аминокислотного анализа, полипептидная цепь содержит 94 аминокислотных остатка. Среди них преобладают глуташтновая кислота, глицин, гистидин и отсутствуют остатки тирозина, аргинина, лсйшна, аспарагиновой кислота. ЕШЬ, состоит из 19 аминокислотных остатков. Обращает на собя внимание наличие а его составе метионина, высокое содержание гастидина, аспарагиновой кислоты, что отличает их от брадини-нин—потенцирующих пептидов, выделенных из пдов других жквотннх.

На основании анализа кинетических кривых следует считать, что ШП-£ соответствует С-нонцевая аминокислотная последовательность Тре-Вал-Ала-Гла-ОН, а ЕПП2 - Тре-Мет-Глу-Лей-Ала-ОН.

Установлено, что молекула НШ^- содержит три дне у ль ~ оилиьш группы, что по-видимому, обеспечивает ста-

бклыюсть полипептида к нагреванию в кислой среда, а также дает основания предположить о существовании трет;тчной структуры молекулы полнпептнда, выделейного из яда.

НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ МЕХАНИЗМА ДЕЙСТВИЯ БРАДИКИШН-ПСГГЩИРЩЙХ ПЕПТИДОВ ИЗ ЯДА ПАУКА КАРАКУРТА

Механизм действия брацикютн-потенцируящих пептидов включает гзаимосвязанше процессы, обусловленные ингибнрувщеи вли-яшом их на ферментативные систеш, участвующие в метаболизме кинмиоэ и аигкотензинов. По совргненньш представления» впгнуа роль в фэр.'лдологических эффектах оота проппратов игровт бради-

кинин-потенцирующйе свойства, т,б, способность усиливать и пролонгировать биологическое действие брадикинина,

В опытах на изолированных отрезках рога матки крысы и ileura морской свинки установлено, что исследуемые пептиды, нё влияя на исходный тонус их, усиливав* спаамогенный аффект ЕК. Действие HIlj проявлялось, начиная с концентрации IxlO"', Effilg - IxIO"^ г/мл (повышение эффекта на IQS&) и усиливалось пропорционально увеличению концентраций.

В сравнительных опытах на lleum морской свинки было изучено влияние ETOlj и Hfflg из яда на спаамогенный эффект брадикинина и других агонистов: ацетилхолина, гистамина и серотонина. БПП| и Enilg в диапазоне концентраций от 1x10"*® до 1x10"® г/мл не оказывали влияния на спазмогенные эффекты указанных агонистов, следовательно, брвцикинин-потенцирующие свойства пептидов имеют специфический характер.

В опытах на наркотизированных уретаном крысах изучали влияние анализируемых пептидов на депрессорннй эффект Ш и прессор-ный эффект ангиотензина I. Установлено, что данные препараты не только усиливают, но и пролонгируют указанный выше эффект брадикинина в вависимости от дозы с 10-16 с до 20-100, т.е. в 2-8 раз.

Начиная с концентрации 0,01 мкг/кг пептида ослабляли прес-сорное действие ангиотензина I (рис. 9). В тоже время брадикинин-потенцируицие пептиды из яда в дозах 0,3-0,5 мкг/кг не изменяли прессорного эффекта ангиотензина II.

Антигипертензивную активность пептидов изучали на ненаркоти-вированных крысах со спонтанно-гипертензивной моделью. HIlj в дозе 50 ыг/кг через I ч после введения снижал артериальное дав-

Рис. 9. Влияние брадикинин-потенцирувщих пептидов на пре-

ссорный эффект ангиотензина I (I мкг/кг, внутривенно) у наркотизированной уретаном крысы. Стрелкой обозначено введение препаратов.

ленив на 30^0,8 мм.рт.ст.^ БШ^ - на 20^0,5. Эффект пептидов достигал максимума к 3-му часу наблюдения и сохранялся в течение 24 Ч после однократного введения.(рис. 10).

В экспериментахЛ-И' ^ътсна очищенном препарате карбоксикатеп-сина установлено, что пептиды, ингибирувт активность фермента. Более сильным ингибитором является БГО1|, что следует из величин

1х10-7 и 1x10"^ М соответственно равных для БГО^ и БГО^. Кинетические константы ингибирования брадикинин-потенцирующих пептидов по отношению к ка рбокс ика тепеину из почек быка равны бхЮ"8 М, для ЕПП2 - 1.6Х10"4.

Нами также было изучено влияние брадикинин-потенидрующих пептидов из яда на активность киннназн паука каракурта. Установлено, что К 1 киниаазы яда ЕЩ^ и ЕГО^ соответственно равны 0,57 и 1,08 мкМ.

АД, мм.рт.ст.

Рис. 10 Влияние БШ| и ШП^ из яда паука каракурта нг АД у спантанко-гипартензивных крыс. По оси абсдесс-вреыя (ч); по осям ординат - изменение АД (им.рт.ст.), Цифры в скобках - дозы препаратов (мг/кг, внутривенно).

Итак,брадикинин-потенцирующив пептида из я.да паука ы-ыо-

¿есЪиз -кгеДес1ш£ииа1;из ИНГИбируюТ вКТИВНОСТЬ КВрбОКСИ-

катепсина из почек бака, а такие торлозят инактивация Ж кинина-зой яда каракурта.

Сопоставление полученных в этой сер«и опитов данных с результатами экспериментов по изучения бра.цикинкн-потенцируютюс свойств пептидов на изолированных отрезках матки красы и 11ег<т морской свинки показывает» что ингабированиа кининаз но является единственным механизмом, лакацнм в основа усиления контракэтшько-го о}фекта Ш пептидами иа яда. Ибо ШП^, обладающий выракеншаш брадиккнан-потонцирующиын своЗсгви»и, оказался наименее активный ингибитором кшшнав.

О возможности некининазного механизма действия исслзпуемых пептидов из яда паука каракурта свидетельствует тот факт, что при обработке изолированного отрезка матки крысы о-фенантролином (5хЮ~ М) биологическое действие пептидов сохранялось.

Использование избирательных блокаторов рецепторов апетилхо-дина (атропин, 1х10"7 г/мл), серотоиина (диэтиламиц-Д-лезергино-воЯ кислоты, ДЦК, 1x10"® г/мл), гисташма (тавепил, 1x10"® г/мл), выявило, что потенцирование контрактильного ^^фекта £К пептонами из яда связано с влиянием на соответствующие структуры в гладяомстечноЯ ткани. Показано, что действие и БШ^ на указанный вжа эффект брадикинина Еыраяено » сдвиге кришх концентрация - эффект влево -параллельно без-изменения максимальных реактаЯ тест-обьекта. Это существенный признак сенсибилизация рецептивной структуры к £К пептидемя из яда паука.

Для детализация механизма гтогенсфувчего действия пептидов исследовали их влияние на общее, специфическое'и неспеци-трс о

фическое связывание Т-Т'/р -5' плазматически,« мембранами. Полученные при этом результата представлены на рис. II,

Кая показано, БГШ^ и ШП^ не £3!<еняпт общего связывания плазматически® мшбраизии, увеличивая при этом специфическое связыванле гз счёт блокирования участков леспе-гйфтческого связывания. Следовательно, потенцирующее действие и ЕШ^ в данном случае проявляется при блокирования одним из взгж.юцейстеуг.щях веществ мест неспедафэтеского связывания брадикинина. С другой стороны, учитывая, что оба пептида являются ингибиторами кининазы II, можно утверждать, что маета неспецифического связывания брадикинина в плазматических мембранах миометрия крыс являются кининазой.

Рис. II Влияние Effilj (Д) и HUlg (Б) на общее, специфическое и неспецифическо^е^язывание плазма-

тическим)! мембранами/ Заштрихованные участки - ке-спенифическое связывание.

Таким образом, представляются возможными несколько способов реализации потендарувщего действия пептидов из яда паука

Latrodectua tredecimguttatua:

- торможение активности ферментов, кнактивирующих брадики-

НИН}

- сенсибилизация брадикишшового рецептора;

- блокирование мест неспецифического связывания брадикини-на, что, в свою очередь, усиливает его фармакологические эффекты .

вывода

I. Методами гель-фильтрации, ионообменной и высокоэффективно» яроцатографии впервые выделены юысокооодщенныв брадгаш-ШШ-ПОТОНЦИруЕВДе пепапгд: ИЗ яда шука Latrodectua trede-c'^uttPtno • roi:3i'i3Hiioeib иод*порлд.-мг. диск-злектро-

форезоы, изозлектричэским фокусированием, анализом аминокислотного состава н рехроматографией.

2. Показано, что BUIj я SHIg является кислыми белками с нзоэлектрической тоской соответственно 4,7 и 3,6 , молекулярной массой Ю ООО и 2500 Д. Молекула HHIj представлена одной полипептидной цепью, состоящей из 94 аминокислотных остатков на н -конце которой находится глутаминовая кислота, ЕШ^ - 19 аминокислотных остатков, на и-концз - глицин.

3. В опытах на животных показано, что пептида усиливают

и пролонгируют спазмогенный и депрессорный эффекты брадикинина, стимулируют высвобождение гистамина из тучных клеток, снижают артериальное давление у спонтанно-гипертеизивгак крыс.

4. Пептида ингибируют активность иарбоксияатепсина из почек быка с К i для ШП| 5x10 Ы, для НП^ - I.GxIO"4, а также тормозят инактивацию брадикинина ниюшазой яда каракурта с

К i 0,57 и 1,08 мкМ.

5. Основная роль в механизме потенцирования брадикинина отводится блокированию мест неспецифического связывания брадикинина.

6. Показана возможность использования выделенных пептидов в качестве потенциальных терапевтических средств.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ I.Голубенко 3., Ахунов A.A., Соснина H.A., академик Садиков A.C.

Брадикинин-расщепляющий фермент из яда паука r_ati-udi;i>tu3 tredo-oimguttatus// I региональное совещание республик Средней Азии ы Казахстана.- Дуканбе .- 1986. -С. 138.

2. Соснина H.A., Голубенко 3., Ахунов A.A. Влияние брацикшшн-потоицирувщего пептида ИВ яда паука Jatrodecltii] t.r ео Lfit;ut tuJ.u tll3 на гипотензивный оффект брпдикинина// У1 Всесогзный сьеэд

фариа кологов.-Ташкент.-1988.-С.251-252.

3. Саснииа H.A. Брадикинин-потенцирующий пептид из яда паука

LatrQJeotus tredeciiüsuttatua // Конференция молодых ученых ПО проблемам укрепления науки и производства. Тезисы докладов.-Фергана.-1988.-С. 25.

4. Соснииа К.А.., Голубенко 3. Лхунов A.A. Стимулирование биологических эффектов брадикинина пептидом, выделенным из яда паука Latrodeotus tredecir.fjutta tu.3 // Узб.бИОЛ. журнал. -1989* 5.-С. 3-5.

5. Брадикинин-лотенцирующий пептид из яда паука Latrodeotus tredeciiaguttatua / Н.А.Соснина, 3.Голубенко, А.А.Ахунов

И др.// ХПС.-1989. -» 5.- С. 399-404.

6. Соснина H.A., Голубенко 3., Ахунов A.A. Ингибитор карбокси-катепсина (ангиотензин-I-превращающего фермента) из яда паука

Latrodeotus tredecinguttatue // Всесоюзный симпозиум по химии белков. Тезисы докладов.- Тбилиси.- 1990.-.С.75

'•7 . Л. А, АЮшп jv , H.A. Soonina , J. Golub . 1': >. Isolation and ch u-a-ctiriaation oi b-'i'lyV lia-pi/UaUatint; peptides the Ггои th» venom oi' Latrodectua tredeoliiguttatua // 9th Kuropean ау.г.уо-з1цв э-i J'jiraal, plant und at.fro'iiul teens. Abetrnet». - ' Estonia. - 1990. - P. 42.