Взаимодействие липосом с плоскими липидными мембранами тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.05 ВАК РФ

Введение.

Список сокращений.

Глава I. Слияние биологических и модельных мембран (обзор литературы).

§ I. Определение слияния; основные направления и методы изучения.

§ 2. Слияние мембран при экзоцитозе.

§ 3. Слияние мембран в некоторых модельных и подумодельных системах.

§ 3.1. Общие проблемы изучения слияния.

§ 3.2. Слияние липосом с клетками.

§ 3.3. Слияние липосом.

§ 3.4. Слияние везикул с плоскими бислоями.

§ 3.4.1. Реконструкция фрагментов биомембран на плоском бислое.

§ 3.4.2. Слияние липосом с плоскими бислоями.

Глава П. Материалы и методы исследования.

§ I. Применение потенциодинамического метода для исследования взаимодействия липосом с БПМ

§ 2. Материалы и методы формирования БПМ и получения липосом.

§ 3. Другие методы.

Глава Ш. Результаты экспериментов и их обсуздение.

§ I. Изменение разности поверхностных потенциалов ) плоских бислоев при взаимодействии их с липосомами.

§ 1.1. Зависимости Д ^ от времени при постоянной концентрации липосом.

§ 1.2. Зависимости ¿S% от кощентрации липосом.

§ 2. Механизм взаимодействия липосом с БЛМ.

§2.1. Происхождение л У, : липосомы или мономеры?.

§ 2.I.I. Зависимости Д % от концентрации различных форм существования липида в растворе.

§ 2.1.2. Изменение А% в присутствии фильтра, непроницаемого для липосом.

§ 2.1.3. Опыты с изменением ионной силы.

§ 2.2. Причины необратимости Л%

§ 2.2.1. Проверка эффективности перфузии.

§ 2.2.2. Влияние липосом на необратимость Л%

§ 3. Слияние липосом с БЛМ.

§3.1. Влияние Са^+ на взаимодействие липосом с нейтральной БЛМ.

§ 3.2. Влияние Са^+ на взаимодействие липосом с заряженной БЛМ.

§ 4. Взаимодействие с БЛМ липосом, содержащих грамицидин А.

§ 5. Сопоставление полученных результатов с литературными данными.

Эволюция современной биологии неразрывно связана с использованием представлений и методов других наук, которое рождает самостоятельные научные дисциплины. Примером такой дисциплины является биоэлектрохимия, возникновение которой было обусловлено необходимостью исследования механизмов биологических процессов, в основе которых лежат электрохимические закономерности. Помимо таких традиционных уже направлений биоэлектрохимии, как изучение механизмов дыхания, фотосинтеза, генерации нервного импульса, рецепции, к настоящему времени оформились и другие, одним из которых стало изучение мембранных взаимодействий. Функции таких взаимодействий в живом организме весьма многообразны. Образование клеточных контактов в тканях А,2/, оплодотворение /3,4/, формирование мышечных волокон / 5 /, воспалительные / 6 / и некоторые другие процессы / 7 / протекают через взаимодействие клеточных (плазматических) мембран. Взаимодействие внутриклеточных везикул с плазматической мембраной играет важнейшую роль в химической передаче нервного импульса /8 - II/, в секреции гормонов и пищеварительных ферментов ДО - 12/, наконец, в регуляции состава самой плазматической мембраны /II - 13/. Патологические изменения в клетках и тканях при некоторых вирусных заболеваниях или при развитии опухолей также могут быть связаны с взаимодействием мембран /14/.

Известно несколько типов взаимодействий /1,2/: обмен компонентами мембран, клеточная адгезия, слияние. Наиболее интенсивно исследуется слияние; это объясняется не только огромной биологической значимостью процессов, включающих этот способ взаимодействия, но и широкими перспективами, которые отбывает слияние мембран в искусственных условиях для решения многих практических задач клеточной биологии, иммунологии, генетики /14,15/.

В последнее время стало очевидно, что важную роль в слиянии биологических мембран играет взаимодействие двойных электрических слоев, существующих на границах мембраны с окружающими её растворами Дб,17/; это особенно наглядно иллюстрируют работы по электростимулируемому слиянию мембран различных типов (напр., /18/). Кроме того, появились основания полагать, что во многих случаях слияние биологических мембран включает взаимодействие их чисто липидных участков /11,19/. Эти выводы стимулируют применение электрохимических методов для исследования слияния и других форм взаимодействия на искусственных фосфолипидных мембранах. Такие мембраны могут быть сферическими (липосомы) или плоскими (бислойные липидные мембраны или ЕПМ) /20,21/; их можно рассматривать как модели биологических мембран, содержащие только липидный матрикс, без белковых компонентов и надмем-бранных структур. С методической точки зрения использование модельных мембран имеет ряд преимуществ - состав, структуру, оптические, механические, электрические и другие свойства таких мембран легко контролировать; в случае плоских бислоев для изучения доступны обе поверхности мембраны; такие мембраны гораздо более стабильны в искусственных условиях, что существенно повышает воспроизводимость результатов.

Целью настоящей работы является исследование взаимодействия и реализация слияния липосом с плоскими бислоями на основе использования электрохимического (потенциодинамического) метода. Взаимодействие мембран в такой системе интересно как близкий аналог взаимодействия внутриклеточной везикулы с плазматической мембраной; кроме того, слияние этих мембран может быть использовано как способ реконструкции функциональных систем биомембран на плоском бислое.

Работа состоит из трех глав и заключения. Глава I (обзор литературы) посвящена анализу результатов исследований слияния биологических и модельных фосфолшшдных мембран. Рассматривая слияние биологических мембран в естественных физиологических процессах, мы уделили основное внимание результатам электронно-микроскопического изучения изменении морфологии мембран в процессе слияния, а также базирующимся на них гипотезам о механизме слияния; именно этот круг работ дает основу для оценки роли липидного матрикса в слиянии биологических мембран и имеет поэтому первостепенное значение для исследований механизма слияния на чисто лшшдных модельных мембранах.

Обсуждая далее общие проблемы в изучении слияния на некоторых модельных и полумодельных системах, мы сосредоточились на вопросе о достоверности факта слияния. Это связано с тем, что слияние мембран в таких системах, как правило, недоступно непосредственному наблюдению, и регистрируются только его следствия: изменения формы, состава, проводимости, емкости и других характеристик мембран. Поскольку в реальных условиях наблюдаемое изменение характеристик всегда является результатом комплекса различных взаимодействий, основная трудность состоит в том, чтобы экспериментально выделить слияние из совокупности протекающих процессов. Успех в решении такой задачи зависит прежде всего от того, насколько хорошо изучены различные формы взаимодействия, то-есть, в какой мере выяснен механизм взаимодействия мембран. В то же время, анализ литературы по взаимодействию липосом или мембранных везикул с плоскими бислоями показывает, что сведения о различных формах взаимодействия здесь весьма ограничены, и в то же время, остро стоит вопрос об адекватности методов регистрации слияния.

В настоящей работе мы исследовали механизм взаимодействия липосом с плоскими бислоями и на этой основе осуществили их слияние. Для этого впервые был применен один из электрохимических методов изучения строения двойного электрического слоя, а именно, потенциодинамический метод, модифицированный с учетом особенностей липидной мембраны. Изложение принципов применения потенциодинамического метода для исследования взаимодействия липосом с ЕПМ дано в главе П.

В главе Ш приведены результаты экспериментов; в §§ I - 4 включено также обоснование постановки ряда опытов и обсуждение некоторых результатов, необходимое для понимания логики нашего исследования. В §5 полученные нами результаты сопоставляются с литературными данными.

В Заключении кратко суммированы основные итоги настоящей работы и указаны возможности их практического использования. Здесь дана также оценка эффективности потенциодинамического метода как инструмента для изучения взаимодействия мембран.

Список сокращений.

БПМ - бислойная липидная мембрана (плоский бислой)

ШЧ - интрамембранные частицы

ЯП - яичный лецитин

ФС - фосфатиднлсерин

ФЭ - фосфатидилэтаноламин

ДОЯ - диолеоиллецитин

ХОД - холестерин

ККМ - критическая концентрация мицеллообразования

- 8

- 120 -ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1. Впервые для исследования взаимодействия липосом с плоскими липидными мембранами применен электрохимический( потенциоди-намический ) метод. В качестве маркера для определения характера взаимодействия использовались заряженные лшщцы липосом, что позволило избежать введения в мембраны модифицирующих добавок.

2. Определена кинетика изменения разности поверхностных потенциалов плоских мембран при взаимодействии их с заряженными ли-посомами. Измерены зависимости разности поверхностных потенциалов плоских мембран от концентрации липосом в водной фазе.

3. Установлено, что взаимодействие приводит к изменению поверхностного потенциала только одной стороны плоской мембраны, обращенной к липосомам. Показано, что изменение поверхностного потенциала является необратимым.

4. Выяснена природа поверхностного потенциала плоских мембран, измеряемого в присутствии заряженных липосом. Показано, что потенциал возникает в результате встраивания заряженных мономеров, присутствующих в суспензии липосом, в обращенный к ним монослой плоской мембраны.

5. Обнаружено, что необратимость поверхностного потенциала обусловлена адсорбцией липосом на поверхности плоской мембраны без обмена липидами через область контакта. о,

6. Подобраны условия Са" - индуцированного изменения заряда стороны плоской мембраны, противоположной той, с которой введены липосомы. Доказано, что такое изменение заряда вызвано слиянием липосом с плоской мембраной, а не латеральной диффузией липосомалъных липидов по краям гидрофильных пор.

7. Исследовало взаимодействие с плоскими мембранами липосом, содержащих антибиотик грашщидин А, образующий в липидном бислое ионные каналы. Показано, что липосомы являются эффективным средством доставки грамицидина А в оба монослоя плоской мембраны как при взаимодействии с одной стороной БЛМ,так и в условиях слияния. Продемонстрирована возможность независимого контроля слияния с БЛМ липосом, содержащих мембранный маркер.

- 122

- 116 -ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе взаимодействие мембран в системе липо-сомы - плоский бислой изучалось по изменениям поверхностного потенциала плоской мембраны. Для этого был впервые применен один из электрохимических методов изучения строения двойного электрического слоя, а именно, потенциодинамический метод, модифицированный с учетом особенностей липидной мембраны.

Главным преимуществом использованного метода по сравнению с другими методами исследования взаимодействия липосом с ШМ является возможность работать на мембранах, не содержащих каких-либо модификаторов (антибиотиков, меченых липидов и др.). Благодаря этому снимается вопрос о влиянии модификаторов на характер взаимодействия мембран, а также существенно упрощается интерпретация результатов, поскольку отпадает необходимость в контрольных опытах, исключающих альтернативные объяснения изменений проводимости или других характеристик плоского бислоя.

Основным параметром, измерявшимся в нашей системе, была разность поверхностных потенциалов (Д1^) плоского бислоя. Регистрация изменений А% при различных воздействиях позволила изучить механизм взаимодействия липосом с плоским бислоем и дала новую информацию о процессах, протекающих в данной системе.

Обнаружено, что при взаимодействии отрицательно заряженных липосом с нейтральными или слабозаряженными плоскими бислоями в буфере низкой ионной силы одновременно протекают два процесса:

1. Диффузия молекул липосомальных липидов к БЛМ через водную фазу и встраивание их в монослой БЛМ, обращенный к липосо-мам.

2. Адсорбция липосом на поверхности БЛМ, не сопровождающаяся обменом липидами между обеими мембранами через область кон

- 117 такта. На нейтральной ЕПМ адсорбция необратима. В случае слабозаряженной ЕПМ липосомы менее прочно связаны с плоским би-слоем, на что указывает частичная обратимость предельного значения .

Новым в этих результатах является вывод о самостоятельном участии молекул липосомальных липидов в процессе взаимодействия с ЕПМ. Такой вывод свидетельствует о высокой чувствительности выбранного метода исследования к изменениям состава монослоев одной из взаимодействующих мембран. Он указывает также на важность исследования механизма взаимодействия мембран, которое дает возможность выявить процессы, сопутствующие слиянию, и вызывающие изменения состава мембран, характерные для слияния. При Са2+-индуцированном слиянии таким процессом может быть латеральная диффузия в "Ьхат -монослой липосомальных липидов, встроившихся в с-монослой на стадиях взаимодействия, предшествующих слиянию.

Исследовано также влияние Са2+ на взаимодействие заряженных липосом с нейтральными и слабозаряженными ЕПМ. Характер изменения Л% указывает на существование нескольких процессов или факторов, влияющих на величину и знак этого параметра мембраны.

При малых концентрациях Са2+ (ОД - I ,.«) изменение Л% возможно в результате увеличения ионной силы раствора и ад-р, р . сорбции Са на ЕПМ. Увеличение ионной силы при введении Са оказывает на А% двоякое действие. С одной стороны, согласно теории 1уи-Чапмена, оно вызывает уменьшение отрицательного поверхностного потенциала с1$ -стороны (уменьшение А% ); с другой стороны, оно приводит к увеличению равновесной концентрации заряженных липосомальных липидов в си -монослое ЕПМ, и следовательно, к увеличению отрицательного поверхностного потенциала сс$ -стороны (увеличение А% ). Адсорбция Са^+ вызывает уменьшение плотности поверхностного заряда сЦ-стороны, то есть уменьшение А% . Суперпозиция указанных процессов приводит к появлению максимума на зависимости Д^(ТГ).

При больших концентрациях Са^+ (I - 10 мМ) могут происходить также слияние и латеральная диффузия мономеров ФС из с -монослоя в 1:гап$ -монослой по краям гидрофильных пор, появление кор, торых индуцируется введением Са . Б случае нейтральной ЕШ контрольные введения тест-ионов показывают, что заряд -стороны не изменяется, так что последние два процесса отсутствуют. Введение Са^+ в систему: слабозаряженная БИЛ - заряженные ли-посомы вызывает увеличение концентрации заряженных липидов в

-монослое БПМ. В этом случае мо1ут протекать все перечисленные выше процессы. Изменение имеет сложный характер, зависящий от вклада каждого процесса в данном опыте.

Увеличение концентрации заряженных липидов (ФС) в монослое может произойти в результате слияния или латеральной диффузии мономеров ФС. В условиях, когда латеральная диффузия возможна, а слияние исключено (липосомы на поверхности ЕДМ отсутствуют), концентрация ФС в ^¿«¿-монослое не увеличивается. Таким образом, в исследованной нами системе индуцированное кальцием увеличение концентрации заряженных липидов в ^апй-монослое БПМ обусловлено истинным слиянием липосом с плоским бисло-ем.

Разработанный метод регистрации слияния по переносу заряженных липидов липосом в txan¿ -монослой БПМ был использован далее как способ независимого контроля слияния с БПМ липосом, содержащих в качестве мембранного маркера антибиотик грамицидин А. Показано, что проводимость БПМ заметно увеличивается как при взаимодействии липосом только с сс& -стороной, так и в уело

- 119 виях слияния. Отсюда вытекает, что липосомы могут служить эффективным средством доставки грамицидина А в оба монослоя липид-ной, а возможно и клеточной мембран. В то же время очевидно, что такое поведение этого антибиотика исключает возможность использования его в качестве маркера для регистрации слияния липосом с БЛМ.

В заключение можно отметить, что примененный нами электрохимический метод исследования системы липосомы-БДМ оказался весьма полезным, так как он дал ценную информацию о способах взаимодействия везикул с плоским бислоем, а также позволил реализовать истинное слияние этих мембран. Вместе с тем, надо признать, что такой метод не пригоден для изучения механизма слияния на молекулярном уровне, так как в опыте удается регистрировать только результаты массового слияния липосом с плоским бислоем. Тем не менее, можно утверждать, что исследованная нами система и используемый метод представляют большой практический интерес для решения проблемы реконструкции. Описанные здесь результаты позволяют надеяться, что слияние липосом с БПМ, регистрируемое по переносу заряженных липосомальных липидов, может быть успешно использовано как способ независимого контроля слияния при встраивании в БЛМ функциональных систем биомембран из протеолипосом или мембранных везикул.

1. Богач П.Г., Курский М.Д.,Кучеренко Н.Е., Рыбальченко В.К. Структура и функции биологических мембран.-Киев,Вища школа, 1981, 336 с.

2. Бауман В.К. Роль кальция в структуре и функционировании биологических мембран.-В кн.: Биомембраны. Структура,функции, методы исследования. Ред. М.Е.Бекер, Г.Я.Дубур. Рига,3инатне, 1977,с.198-215.

3. Bichoff R. Myoblast fusion.-In: Membrane fusion. Eds.G.Poste, G.L.Nicholson, Amsterdam, Elsevier / North-Holl.Biomed.Press,1978,p.127-179.

4. Papadimitriou J.M. Macrophage fusion in vivo and in vitro: a review.-In: Membrane fusion.Eds G.Poste, G.L.Nicholson, Amsterdam, Elsevier / North-Holl.Biomed.Press,1978,p.181-218.

5. Carlile M.J., Gooday G.W. Cell fusion in myxomycetes and fungi. In: Membrane Fusion. Eds.G.Poste,G.L.Nicholson, Amsterdam, Elsevier / North-Holl.Biomed.Press,1978,p.219-265.

6. Аксельрод Д. Медиаторы нервной системы.-В сб.:Молекулы и клетки, вып.6, М.,Мир,1977,с.250-266.

7. Куффлер С.Николе Дж. От нейрона к мозгу.-Пер.с англ. М.,Мир,1979, 439 с.

8. Леви А., Сикевиц Ф. Строение и функции клетки.-Пер.с англ. М., Мир, 1971, 583 с.- 123

9. Meldolesi J.,Borgese N.,De Camilli P. ,Cecсarelli B. Cytoplasmic membranes and the secretory process.-In: Membrane Fusion. Eds.G.Poste ,G.L.Nicholson,Amsterdam,Elsevier /North-Holl.Biomed.1. Press,1978,p.509-627.

10. Сэтир Б. Конечные стадии процессов секреции.-В сб.: Молекулы и клетки, вып.6, М., Мир, 1977, с.193-215.

11. Wirtz K.W.А. Transfer of phospholipids between membranes.Bio-chim.et Biophys.Acta,197^,,N 2,p.95-117.

12. Рингерц Н.,Сэвида P. Гибридные клетки.-Пер.с англ.,М.,Мир, 1979', 415 с.

13. Зеленин A.B., Кущ A.A.,Прудовский И.А. Реконстуированная клетка. -Ред.М.Н.Мейгель. М.,Наука,'1982,' 207 с.

14. Zimmermann U. Electric field-mediated fusion and related electrical phenomena.-Biochim.et Biophys.Acta,1982,69^1,p.227-277.

15. Orci L.,Perrelet A. Ultrastructural aspects of exocytotic membrane fusion.-In: Membrane Fusion.Eds.G.Poste,G.L.Nicholson, Amsterdam,Elsevier / North-Holl.Biomed.Press,1978,p.629-656.

16. Liposomes: from physical structure to thereapeutic applications. Ed. C.G.Knight, N.Y., Elsevier / North-Holl.Biomed.Press,1980, H97 P.

17. Tien H.T. Bilayer lipid membranes (BLM): Theory and practice. N . У. , Marcel Dekker ,197**, 655 p.- 124

18. Poste G., Pasternak C.A. Virus-induced cell fusion.-In: Membrane Fusion. Eds.G.Poste, G.L.Nicholson, Amsterdam, Elsevier / North-Holl.Biomed.Press,1978,p.ЗО5-З6Т.

19. Финеан Дж. Биологические ультраструктуры.-Пер.с англ., М.,Мир, 1970, 328 с.

20. Левин C.B. Структурные изменения клеточных мембран.-Ред.А.С.Тро-шин. Л.,Наука,1976, 224 с.

21. Конев C.B., Волотовский И.Д. Структурные перестройки биологических мембран.-В кн.: Биомембраны. Структура, функции, методы исследования. Рига, Зинатне, 1977, с.42-76.

22. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.В. Флуоресцентные зонды в исследованиях биологических мембран.-М.,Наука,1980, 320 с.

23. Nir S., Bentz J., Wilschut J., Duzgunes N. Aggregation and fusion of phospholipid vesicles.-In: Progress in surface science, 19Öl,v.l3,N 1, p. 1-121*.

24. Scheidner P.J., Stein J.M. Differential Scanning Calorimetry

25. DSC) of biological membranes: Instrumentation.-In: Methods in Membrane Biology. Ed. E.Korn, Plenum Press, New York ,1975, v. , P.76-1H.

26. Poste G., Allison A.C. Membrane fusion.-Biochim.et Biophys.Acta, 1973,v.300,N 3,p.H21-U65.

27. Allen R.D. Membranes of ciliates: ultrastructure,biochemistry and fusion.-In: Membrane Fusion. Eds.G.Poste,G.L.Nicholson, Amsterdam,Elsevier / North-Holl.Biomed.Press,1978,p.657-763.

28. Pinto da Silva P.,Nogueira M.L. Membrane fusion during secretion. A hypothesis based on electron microscope observations of Phytophtho'ra palmivora zoospores during encystment.-J .Cell. Biology,1977sv.73,N 1,p.16I-I8I.

29. Робертис Э.де., Новинский В.,Саэс ш. Биология клетки.-Пер.с англ.', М.,Мир,'1968, 473 с.

30. Заалишвили Г.В. Электронномикроскопическое изучение локализации кальция в клетках корневых апексов ячменя.-Автореф.канд. дисс., М. ,1983, 21 с.

31. Parsegian V.A. Considerations in determining the mode of influence of calcium on vesicle-membrane interaction.-Society for Neuroscience symposia, 1977, vol.11, p.l6l-171.

32. Plattner H. Membrane behaviour during exocytosis.-Cell.Biol. Intern.Rep.,1981,v.5,N 5,P.^35-^59.

33. Ho. Lagunoff D. Membrane fusion during mast cell secretion.-J.Cell.

34. Biol., 1973,v.57,N 1-2,p.252-259. Hi. Chi E.H., Lagunoff D.,Kochler J.K. Freeze-fracture s^idy of mast cell secretion.-Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1976,v.73,N 8, p.2823-2827.k2. Lavson D., Raff M.С.,Gomperts B.,Fevtrell C.,Gillula N.S.

35. Molecular events during membrane fusion.A study of exocytosis in rat peritoneal mast cells.-J.Cell.Biol.,1977.72,N l,p.2U2-259.- 126

36. Ьз. Dreifuss J.J., Akert К., Sandri С., Moor H. Specific arrangement of membrane particles at sites of exo-endocytosis in the freeze-fractured neurohypophysis.-Cell Tissue Res.,1976,v.165, N 2 ,p.317-325.

37. Electrostimulated fusion and fission of bilayer lipid membranes. -Biochim.et Biophys.Acta,1983,v.730,N 2,p.395-398.i+9. Меликян Г.Б.,Черномордик Л.В.,Абидор И.Г.,Чайлахян Л.М.,р,

38. Чиэмаджев Ю.А. Индуцируемое ионами Са слияние бислойных липид-ных мембран, не содержащих растворителя.-Докл.АН СССР, 1983, т.269', № 5,' с.I22I-I225.

39. Маркин B.C., Козлов М.М. 0 первичном акте в процессе слияния мембран.-Биофизика', 1983,'т.28,'№ I',с.72-7?.

40. Иауаг R., Hope M.J., Cullis P.R. Phospholipids as adjuncts for calcium ion stimulated release of chromaffin granule contents: implications for mechanisms of exocytosis.-Biochemistry ,1982 ,v. 21 ,N 20 ,p Л583-1+ 589.- 127

41. Heuser J.E.,Reese T.S.,Landis D.M.D. Functional changes in frog neuromascular junctions studied vith freeze-fracture J.of Neurocytology,197^>v.3,N 1,p.109-131.

42. Gratzl M. Transport of membranes and vesicle contents during exocytosis.-In: Biological chemistry of organelle formation. Ed.Th.Bucher et al. , Berlin, Springer ,1980,p . 165-17^.

43. Plattner H., Reicher K.,Matt H. Bivalent cation stimulated ATPase activity at preformed exocytotic sites in Paramecium coincides with membrane-intercalated particles aggregates.-Nature,1977,%267,N 5613 ,p.702-70U.

44. Young P.R.,Vacante D.A.,Snyder W.R.Protein-induces aggregation of lipid visucles.Mechanism of myelin basic prot eirwnyelin interaction .-J.Am.Chem.Soc . ,1982 ,v. 10U ,11 2 5 ,p .7287-7291.

45. Creutz C.E.,Pazoles C.I.,Pollard H.P. Identification of an adrenal medullary protein (synexin) that causes calcium-dependent aggregation of isolated granules.-J.Biol.Chem.,1978, v.253,p.2858-2866.

46. Hong K.,Duzgunes N.,Papahadjopoulos D. Role of synexin in membrane fus ion . J . Biol. Chem. , 1981, v. 2 5 6 , N 8 ,p . 36U1-36U1+.

47. Creutz C.E.,Scott J.H.,Pazoles C.I.,Pollard H.P. Further characterization of aggregation and fusion of chrommafin- 128 granules by synexin as a model for compound exocytosis.-J.Cell. Biochemistry,1982,v.18,N 1 ,p.87-97.

48. Sanderman H. Regulation of membrane enzymes by lipids.-Biochim. et Biophys.Acta,1978,v.215,N 2,p.209-237.

49. Floreani M.,Bonetti A. C. ,Carpenedo F. Increase of Ha4"/^ ATPaze activity in intact rat brain synaptosomes after their interaction with phosphatidylserine vesicles.-Biochim.Biophys. Res.Commun.,1981,v.101,N k,p.1337-13^.

50. Baba A.,Lee E.,0hta A.,Tatsuno T.,Iwaka H. Activation of adenylate cyclase of rat brain by lipid peroxidation.-J.Biol.Chem., 1981,v.256,N 8,p.3679-368H.

51. Ginsberg B.H.,Jabour J.,Spector A.A. Effect of alternations in membrane lipid unsaturation on the properties of insulin receptor of Ehrlich ascites cells.-Biochim.et Biophys.Acta,1982, v.690,N 2,p.157-16U.

52. Trivedi A.,Khare S.,Singhal G.S.,Prasad R. Effect of phosphatidylcholine and phosphatidylethanoleamine enrichment on the structure and function of yeast membrane.-Biochim.et Biophys. Acta,1982,v.692,N 2,p.202-209.66.

53. Fodor S.P.A.,Dunker A.K. Lipid tail group dependence of the fd coat protein conformation.-Biophys.J.,1981,v.33,N 2, part II,p.6a.

54. De Grip W.I.,Drenthe E.H.S.,van Echteld C.J.A.,De Kruiff B., Verkleij A.J.A possible role of rhodopsin in maintaining bilayer structure in the photoreceptor membrane.-Biochim.et Biophys. Acta,1979,v.558,N 3,p.330-337.

55. Chandler D.,Heuser J.E. Arrest of membrane fusion events in mast cells by Quick-Freezing.-J.Cell.Biol.,1980,v.86,N 1, P.666-67I+.

56. Chandler D.E.,Heuser J.E. Membrane fusion during secretion: cortical granule exocytosis in sea urchin eggs as studied.- 128 by quick-freezing and freeze-fracture.- J.Cell.Biol.,1979, v.83, N 1, p.91-108.

57. Heuser J.S., Reese T.S., Dennis M.J., Jan V., Evans L. Synaptic vesicle exocytosis captured by Quick-Freezing and correlated with quantal transmitter release.-J.Cell Biol., 1979, v.8l,1. N 2, p.275-300.

58. Shotton D. Quick-Freezing the new frontier in freeze-fracture. -Nature, 1980, v.283, N 5742, p.l2-ll+.

59. Ornberg R.L., Reese T.S. Beginning of exocytosis captured by Rapid-freezing of Limulus Amoebocytes.-J.Cell.Biol., 1981, v.90, N 1, p . UO-5^-.

60. Haacke B., Plattner H. Synchronous exocytosis in Paramecium cells. III. Rearrangement of membranes and membrane-associated structural elements after exocytosis performance.-Exp.Cell.Res., 198U, V.15L, N 1, p.21-28.

61. Pinto da Silva P., Kachar B. Quick-freezing vs chemical fixation: capture and identification of membrane fusion intermediates.-Cell.Biol. Intern. Rep. , 1980, v.l+, N 7, p.625-61+0.

62. Chandler D.E. Quick-freezing avoids specimen preparation artifacts in membrane fusion studies.-In: Freeze-Fracture: Methods,

63. Artifacts and Interpretations. Eds. J.E.Rash and C.S.Hudson., N.Y., Raven Press , 1979, p. 44 87.- 129

64. Plattner H. Fusion of cellular membranes.-In: Transport of Macromolecules in cellular systems. Ed.S.C.Silverstein. Life Science Research Report II, Dahlem Konferenzen, Berlin,1978, p.1*65-^88.

65. Hasty D.L., Hay E.D. Freeze-fracture studies of the developing cell surface. II. Particle-free membrane blisters on glutar-aldehyde-fixed corneal fibroblasts are artifacts.-J.Cell.Biol., 1978,v.78,N 3,p.756-768.

66. Bearer E.L., Duzgiines II., Friend D. S. ,Papahad jopoulos D. Fusion of phospholipid vesicles arrested by Quick-Freezing. The question of lipidic particles as intermediates in membrane fusion.-Biochim.et Biophys.Acta,1982,v.693,N 1,p.93-98.

67. Knoll G., Oebel G., Plattner H. A simple sandwichcryogen—jet— Procedure with high cooling rates for cryofixation of biological materials in the native state.-Protoplasma,1982,v.Ill,N 3, P.161-176.2 +

68. Hope M.J., Walker P.C., Cullis P.R. Ca and pH-induced fusion of small unilamellar vesicles consisting of phosphatidylethano-leamine and negatively charged phospholipids: A Freeze-Fracture study.-Biochim.Biophys.Res.Commun.,1983,v.110,N 1,p.15-21.

69. Breisblatt N., Ohki S. Fusion in phospholipid spherical membranes: effect of cholesterol,divalent ions and pH.-J.Membr.Biol.,1976,v.29,N 2,p.127-1^6.- 130

70. Марголис Л.Б.,Нейфах А.А. Взаимодействие липосом с клетками. Липосомы с жидкокристаллической мембраной.-Усп.совр.биол., 1982', т.93', № 3', с.214-229.

71. Марголис Л.Б.,Нейфах А.А. Взаимодействие липосом с клетками. Липосомы с твердой мембраной, протеолипосомы, реакции клеток. -Усп. совр. биол.', 1982,' т. 94, № I,' с. 83-93.

72. Margolis L.В.,Victorov A.V.,Bergelson L.D. Lipid-cell interactions.A novel mechanism of transfer of liposome-entrapped substances.-Biochim.et Biophys.Acta,1982,v.7202-3,p.259265.

73. Papahodjopoulos D.,Mayhew E.,Poste G.,Smith S. Incorporationof lipid vesicles by mammalian cells provides a potential method for modifying cell behaviour.-Nature,197^,v.252,N 5480 p.1бЗ-1б5.

74. Martin F.J., MacDonald R.C. Phospholipid exchange between bilay-er membrane vesicles.-Biochemistry,1976,v.15,NI, p.321-327.

75. Duckwitz-Peterlein G.,Eilenberger G.,0verath P. Phospholipid exchange between membranes.-Biochim.et Biophys.Acta,1977^69, К 3,p.311-325.

76. Thilo L. Kinetics of phospholipid exchange between bilayer membranes.-Biochim.et Biophys.Acta,1977,v.k69,N 3,p.326-33^.

77. Lansman J.,Haynes D.H. Kinetics of a Ca -triggered mem"brane aggregation reaction of phospholipid membranes.-Biochim.et Biophys .Acta,1975,c.39*+, N 3,p.335-3^7.

78. Morgan G.G.,Thomas E.W., Yianni Y.P. The use of fluorescence energy transfer to distinguish between PEG-induced aggregation and fusion of phospholipid liposomes.-Biochim.et Biophys.Acta, 1983,v.728,N 3,p.356-362.

79. Papahadjopoulos D.,Vail ¥.-J.,Jacobson K.,Poste G. Cochleatelipid cylinders: formation by fusion of unilamellar lipidvesicles.-Biochim.et Biophys.Acta,1975,v.39^,N 3,p.U83-U9I.2 +

80. Ginsberg L. Does Ca cause fusion or lysis of unilamellar lipid vesicles? -Nature , 1978 , v . 27 5 ,11 5684 ,p.758-760.

81. Portis A.,Newton C.,Pangborn ¥.,Papahadjopoulos D. Mechanism2+of membrane fusion: evidence for an intermediate Ca -PL2 +complex, synergism with Mg and inhibition by spectrin.-Biochemistry ,1979,v.18,N 1-2,p.780-790.2 +

82. Miller C.,Racker E. Ca -induced fusion of fragmented SR(ve-sicles) with artificial planar bilayer.-J.Membr.Biol.,1976,v.30,N 3,p.283-300.

83. Cohen J.A.,Moronne M.M. Gramicidin A as a probe of microsome interactions with planar BLM.-Biophys.J.,1976,v.l62,p.113a.

84. Cohen F.S.,Akabas M.H.,Zimmerberg J.,Finkelstein A.Parameters affecting the fusion of unilamellar phospholipid vesicles with planar bilayer membranes .-J. Cell Biol. ,198^ , v. 98 SN 3,p.l051*-10б2.

85. Akabas M.H.,Cohen F.S.,Finkelstein A.Separation of the osmoti-cally driven fusion event from vesicle-planar membrane attachment in a model system for exocytosis.-J.Cell Biol.,198U,v.98, N 3,p.ЮбЗ-1071.

86. Repke H.,Berczi A.,Matthies H.Incorporation of brain membrane proteins into planar bilayer lipid membranes.-Acta biol.med. germ.,1980,Bd 39,S.657-663.

87. Latorre R.,Vergara C.,Hidalgo С.Reconstitution in planar lipid2+ +bilayers of a Ca -dependent К channel from transverse tubulemembranes isolated from rabbit skeletal muscle.-Proc.Natl.Acad. Sci.USA,1982,v.79,N 2 ,p.805-809.2+ 4

88. Vergara C.,Latorre R. Kinetics of Ca -activated К channels from rabbit muscle incorporated into planar bilayers.-J.Gen. Physiol.,1983,v.82,N U,p.5^3-568.2 +

89. Moczydlowski E.,Latorre R. Gating kinetics of Ca -activated K+ channels from rat muscle incorporated into planar lipid bilayers.-J.Gen.Physiol.,1983,v.82,W k,p.511-5^2.

90. Соколов Ю.В. Изучение взаимодействия липосом с плоскими бислой-ными фосфолипидными мембранами.- Авто реф. канд. дисс., Киев, 1982, 19 с.

91. Krueger B.K.,Worley III J.F.,French R.J.Single sodium channels from rat brain incorporated into planar lipid bilayer membranes .-Nature,1983,v.30 3,N 5913,p.172-175.- 133

92. П4.Бабунашвили И.Н. Структура контактов клеточных и искусственных мембран.-Автореф.канд.дисс. Пущине', 1982. 20 с.

93. Пб.Саляев Р.К. Взаимодействие изолированных вакуолярных мембран растений с искусственной фосфолипидной мембраной.-Докл.АН СССР, 1983, т.270, № I, с.247-250.

94. Пб.Чизмаджев Ю.А., Черномордик Л.В., Пастушенко В.Ф., Абидор И.Г. Электрический пробой бислойных липидных мембран.-В сб.: Итоги науки и техники. Сер. Биофизика мембран. Ред.П.Г.Костюк, 1982, т.2, с.161-266.

95. Петров В.В. Изучение зависимости ионной проницаемости от поверхностного потенциала и фазового состояния липидных мембран.-Автореф.канд.дисс. М.,1979.-23 с.

96. Антонов В.Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран.-Ред.Ю.А.Чиз-маджев. М., :Наука, 1982, 151 с.

97. П9.Ксенкек О.С., Омельченко A.M. Дискретная проводимость бислойных липидных мембран, индуцируемая додецилсульфатом натрия.-Докл. АН СССР, 1974, т.218, № I,с.219-221.

98. Ксенжек О.С., Гевод B.C. Исследование дискретной проводимости бислойных мембран в присутствии додецилсульфата натрия.-Электрохимия, 1975, т.II, № 10, с.1566-1570.

99. Hianik Т., Laputkova G., Vondrejs V. Current response of bilayer lipid membrane to killer factor from Saccharomyces cerevisae T158C.-General physiology and biophysics, 198*1, v.3, N 1,p.93-95«

100. Bach D. Interaction of bilayers with basic polypeptieles.il. Interaction of phospholipid bilayers with copolymer L-Lysine/L-Phenylalanine.-J.Membr.Biol., 1973, v.l4, N 1, p.57-62.

101. Лев А.А. О сходстве параметров одиночных ионных каналов, вызываемых введением в липидные мембраны веществ различной химической природы.-В сб.: Биологические мембраны. Структура и функции.

102. Ш советско-швейцарский симпозиум/. Ташкент, 1983, с.37.

103. Ивков В.Г., Берестовский Г.Н. Динамическая структура липидного бислоя.-Ред.Л.Д.Бергельсон, М., Наука, 1981, 296 с.

104. Grant C.W.M. Lipid lateral phase separations. Spin label andfreeze-fracture electron microscopic studies.-Biophys.J., 1975,v.15, N 9, p.9^9- 954.

105. Kimura H., Nakano H. Successive phase transitions in lipid membranes.-Molecular Crystals and Liquid Crystals, 198l,v.68,N 2 p.289-299.

106. Freire E. Domain structure and physical properties of lipid membranes.-Biophys.J., 1981, v.33, 191a.

107. Биохимическое исследование мембран. Ред. Э.Мэдди. Пер.с англ. М., Мир, 1979, 460 с.

108. Соколов Ю.В., Лишко В.К. Изучение слияния плоских бислойных фосфолипидных мембран с липосомами.-Биохимия, 1979, т.44, № 2, с.317-323.

109. Leto T.L., Roseman M.A., Holloway P.W. Mechanism of exchange of cytochrome b^ between phosphatidylcholine vesicles.-Biochemistry ,1980,v.l9,N 9,p.1911-1916.

110. Gad A.E.,Broza R., Eytan G.D.Fusion of cells and proteolipo-somes: incorporation of beef heart cytochrome oxidase into rabbit erythrocytes.-FEBS Lett.,1979,v.102,N 2 ,p . 230-231*.

111. Huestis W.H.,Cook S.L.,Boumas R. Effect of phospholipid fluidity on intermembrane transfer of intrinsic proteins.-Biophys. J. ,1981,v.33,p.8a.

112. Pohl ¥. ,Strark G.,Trissl H.-W.Interaction of liposomes with black lipid membranes.-Biochim.et Biophys.Acta,1973,v.318,1. N 3,p.U78-U8l.

113. Гришин Е.И., Ненашев В.В., Берестовский Г.Н. Взаимодействие липосом с БЖ.-Биофизика, 1979, г.24, № 3, с.467-471.1^5.Razin М. , Ginsburg Н. Fusion of liposomes with planar lipid bilayers.-Biochim.et Biophys.Acta, 1980, v.598, N 2 p.285-292.

114. Bolard J., Seigneuret M., Hoechi M. Laser Raman Spectroscopy study of specifically deuterated phospholipid bilayers.-Biochemistry, 1980, v.19, N 9, p.1938-19^3.

115. Ермишкин JI.H., Зильберштейн А.Я. Ионные каналы, образуемые антибиотиками.-В сб.: Итоги науки и техники АН СССР. Сер.Биофизика мембран. Ред. П.Г.Костюк, 1982, т.2, с.82-167.

116. Cortijo M., Chapman D. A comparison of the interactions of cholesterol and gramicidin A with lipid bilayers using an infrared data station.-FEBS Lett., 1981, v.l31,N 2,p.2^5-2^8.

117. Ghosh R., Seelig R. The interaction of cholesterol with bilayers of phosphatidylethanolamine.-Biochim.et Biophys.Acta,1982, v.691,N 1,p,151-l60z.

118. Leutz B.R., Barrow D., Hoechi M. Cholesterol- PC interactions in multilamellar vesides .-Biochemistry , 1980 ,v.19 9,p.19^3-195^.2 +

119. Черномордик JI.B. »Чизмаджев Ю.А.Электрический пробой бислойных- 138 липидных мембран.-Докл.АН СССР',1978','т.24О,'li°- 3,'с.733-736.

120. Chizmadzhev Yu.A.,Abidor I.G. Bilayer lipid membranes in strong electric fields.-Bioelectrochemistry and Bioenergetics, 1980,v.7,p.83-100.

121. Абидор И.Г., Ванисек П.Датулян С. А. »Черномордик Л.В. Поверхностный потенциал бислойных липидных мембран в растворах 1:1 электролитов.-Электрохимия,I981,т.17,® 12, с.I844-1851.

122. Богуславский Л.И. Биоэлектрохимические явления и граница раздела фаз. Ред.А.А.Лев. М., Наука," 1978,' 360 с.

123. Матинян Р Н.С., Эршлер И.А., Абидор К.Г. Протонное равновесиена поверхностях бислойных липидных мембран.-Биологические мембраны', 1984," т.I, № 3', с.254-267.

124. De Cuyrer M.,Jonian M.,Dangrean H.Spontaneous phospholipid transfer between artificial vesicles followed by Free-Flow Electrophoresis.-Biochim.Biophis.Res.Commun. 1980, v.95, N 3, p.122U-1230.

125. Белая M.A. Теория взашодействия заряженных липидных мембран.-^тореф. кавд. дисс. М, 1981, 24стр.

126. Кругляков П.М.',Ровин Ю.Г. Шизико-химия черных углеводородных пленок. -Ред.А.И.Бурштейн. М.,Наука,1978, 183 с.

127. Everitt С.Т., Haydon D.A. Electrical capacitance of a lipid membrane separating two aqueous phases.-J.Theor.Biol.,19б9, v.18,p.371-379.- 139

128. McLaughlin S. Electrostatic potentials at membrane-solution interface.-Current Topics in Membranes and Transport, 1977, v.2, p.Tl-lUU.

129. Gruen D.W.R., Wolfe J. Lateral tensions and pressures in membranes and lipid monolayers.-Biochim.et Biophys.Acta, 1982, v.688, N 5, p.572-580.

130. Hall J.E., Latorre R. Nonaktin K+ complex as a probe for membrane asymmetry.-Biophys.J., 1976, v.15, N 1, p.99-103.

131. Tanford C. The Hydrophobic effect. Formation of micelles and biological membranes.-Wiley, N.Y., 1980, 233 p.

132. Pattus F., Desnuelle P., Verger P. Spreading of liposomes at the air-water interface.-Biochim.et Biophys.Acta, 1978, v.507, N 1, p.62-70.

133. Massari S., Arslan P., Nicolussi A., Colonna R. I. Phospholipid release from sonicated vesicles induced by a "critical" fatty acid concentration.-Biochim.et Biophys.Acta, 1980, v.599, N 1-2, p.110-117.

134. Le Neveu D.M.,Rand H.P.,Parsegian V.A.,Gingell D. Measurement and modification of forces between lecithin bilayers.--Biophys. J . , 1977, v.l8, N 2, p.209-230.

135. Fettiplace R.,Gordon L.G.,Hladky S.B.,Requena J.,Zingsheim H.P., Haydon D.A, Techniques of the formation and examinationof "black" lipid bilayer membranes.-In: Methods in membrane biology. Ed. E.Korn, v.U, Plenum Press, New York,1975,p.1-75.

136. Bamberg E., LSuger P. Blocking of gramicidin channel by divalent cations.-J.Membr.Biol., 1977, v.35, N p.351-375.

137. Weinstein S., Wallace B.A., Blout E.R., Morrow J.S., Veatch W.

138. Conformation of gramicidin A channel in phospholipid vesicles: 13 19a C and F nuclear magnetic resonance study.-Proc.Natl. Acad.Sci.USA, 1979, v.76, N 9, p.U230-U23U.