Синтез производных 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-d]- и 5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидинов тема автореферата и диссертации по химии, 02.00.10 ВАК РФ

Кузнецов Алексей Юрьевич

СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[3,4И 5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОПИРИДО[4,3-</]ПИРИМИДИНОВ

02.00.10 - Биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 2006

Работа выполнена на кафедре органической химии Российского Государственного Аграрного Университета-МСХА имени К.А. Тимирязева и в ООО" АСИНЭКС-Медхим".

Научный руководитель:

кандидат химических наук, доцент

Н.Л.Нам

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

А.В.Варламов П.Б.Курапов

Ведущая организация:

Институт органической химии имени Н.Д.Зелинского РАН

Защита диссетрации состоится " декабря 2006 г. в/^1_час. на

заседании диссертационного совета К 220.043.04 при Российском Государственном Аграрном Университете - МСХА имени К.А. Тимирязева по адресу: 127550, Москва, Тимирязевская ул., 49.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ МСХА

Автореферат разослан

II

ноября 2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Являясь структурными аналогами фолиевой кислоты, пир идо [с1]пирими дины эффективно ингибируют

д еги др о ф о латр едуктазу, подавляя рост многих видов патогенных микроорганизмов (Pneumocystis carnii, Toxoplasma gondii, Parasitic protozoa и др.). Огромный интерес пиридо[с1]пиримидины привлекли к себе в последние годы как селективные ингибиторы протеинкиназ. В настоящее время многие из этих соединений проходят последние стадии клинических испытаний в качестве противоопухолевых препаратов для лечения всех основных видов злокачественных опухолей. Кроме того, большинство таких соединений являются эффективными препаратами для лечения артритов, астмы, остеопороза, сердечной недостаточности, воспаления легких и атеросклероза.

Особый интерес представляют производные тетрагидропиридо[с!]пирими-динов, имеющие заместители у насыщенного атома азота. Среди соединений этого класса обнаружены вещества обладающие высокой противо-тромботической, противоопухолевой, церебральной активностью, а также антагонисты а( - адренорецепторов. При этом направление и эффективность биологического действия тетрагидропиридо[<1]пиримидинов во многом зависит от заместителей в их гетероциклическом ядре. Поэтому разработка новых универсальных методов синтеза тетрагидропиридо[с1]пиримидинов является актуальной проблемой.

Цель работы заключалась в разработке новых универсальных методов синтеза 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-с1]- и [4,3-с1]пиримидинов, имеющих самые разнообразные заместители в положениях 2,4,6 и 7 пиридо[ё]пиримиди-нового ядра.

Научная новизна и практическая значимость.

1). Разработан универсальный метод синтеза новых 2-замещепных производных 5,6,7,8-тетрагидро-3#-пиридо[3,4-с1]- и [4,3-й]пиримидин-4-онов на основе реакций амидинов и гуанидинов с 1-бензил- и \-mpem-бутоксикарбонил-замещенными производными З-оксопиперидин-4-этилкарбо-ксилата и 4-оксопиперидин-З-этилкарбоксилата.

2). Предложен новый эффективный метод мягкого аминирования 3#-тетрагидропиридо[с!]пиримидин-4-онов по положению 4 пиридопиримидиново-го ядра, используя последовательные реакции 3#-тетрагидропиридо[с1]пири-мидин-4-онов с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и аминами.

3). Разработан новый универсальный метод синтеза разнообразных 6- и 7-арилметилзамещенных производных 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-с1]- и [4,3-сЦпиримидинов на основе реакций 5,6,7,8-тетрагидропиридо[с1]пиримидинов с альдегидами в присутствии NaHB(OAc)3.

4). Предложены методы синтеза новых гетероциклических систем на основе последовательных реакций ЗН-пиридо[<1]пиримидин-4-онов с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты, гидразином и различными конденсирующими агентами (1,1'-карбонилдиимидазолом, ß-кетоэфирами, а-хлорацета-нилидами, этилксантогенатом).

В настоящей работе был сделан акцент на разработку методов синтеза и изучение свойств именно N-арилметилзамещенных тетрагидропяридо[с!]пи-римидинов, которые с одной стороны являются удобными синтонами для получения новых производных этого ряда, а с другой стороны сами интересны как потенциальные биологически активные вещества.

В общей сложности синтезировано и с помощью элементного анализа, ИК и ЯМР ]Н спектроскопии и масс-спектрометрии доказано строение около 160 новых соединений. Среди полученных соединений проведен поиск биологически активных веществ на основе комплексного подхода, включающего стадию предварительного компьютерного скринирования биологической активности (пакет программ SYBYL 7.2, Tripos Inc.) и последующих испытаний на биомишенях серотониновых и дофаминовых рецепторов подтипа 5НТ1А и D2 , а также на ряде киназ: GSK3B, Р38, Aurora A, CSK, LCK, JNK и ВТК. В результате проведенных испытаний in vitro выявлен ряд соединений, обладающих высоким процентом связывания серотониновых рецепторов (68-82%) и способных, в частности, оказывать терапевтическое воздействие при лечении вегетативных нервных расстройств. Кроме того, обнаружено несколько веществ, являющихся селективными ингибиторами протеинкиназ GSK, JNK и LCK.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на трех международных конференциях: III Международной конференции по химии и биологической активности азотсодержащих гетероциклов (Черноголовка, 2006), Международной конференциии "Органическая химия от Бутлерова и Бейльштейна до современности" (Санкт-Петербург, 2006) и I Европейском химическом конгрессе (Будапешт, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи и 3 тезиса докладов на научных конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 173 машинописных страницах и состоит из введения, литературного обзора по синтезу и свойствам пиридо[с!]пиримидинов, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация содержит 9 таблиц и 3 рисунка. Библиография включает 126 ссылок.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Синтез новых 5,6,7,8-тетрагидро-3/зГ-пиридо[с1]пиримидин-4-онов

Схема 1

з

Исследование реакций р-кетоэфиров 1 и 2 с амидинами и гуанидинами в присутствии ИаОЕг показало, что основными продуктами данных реакций с выходом 71-88% являются соответствующие 7-бензил-5,6,7,8-тетрагидро-3//-пиридо[3,4-с!]пиримидин-4-оны За-б и 6-бензил-5,6,7,8-тетрагидро-3#-пиридо[4,3-<3]пиримидин-4-оны (схема 1). Аналогично были получены с выходом 75-86% новые соединения 7а-с1 и 8а-(1 (схема 1), имеющие легко удаляемые при кислотном гидролизе /ярелг-бутоксикарбонильные заместители в положениях 6 или 7 тетрагидропиридопиримидинового ядра.

Для соединений ЗГ и 7Ь были проведенны дополнительные иследования с привлечением градиентного метода ШС>С ,3М-'Н (Ш).Установленно, что в области бц12-13 м.д. отсутствует ожидаемый сигнал, который можно было бы отнести к группе Ы-Н. Этот факт позволяет утверждать, что в растворе ОМСО-06 соединения 3{ и 7Ь существуют в енольной форме 31ХС) и 7Ь(С).

2. Синтез 4-амино-5,6,7,8-тетрагидропиридо[с1]пиримидинов

Наиболее распространенный метод синтеза 4-аминопиридо[с1]пирими-динов включает длительное (10-12 ч) кипячение ЗН-пиридо[с1]пиримидин-4-онов с БОСЬ или РОСЬ и последующее нуклеофильное замещение атомов хлора в промежуточно получаемых 4-хлорпиридо[с1]пиримидинах на аминогруппы. Протекание последней стадии существенно затрудняется при наличии у 4-хлорпиридо[ё]пиримидинов сильных электроно-донорных заместителей в положении 2 пиридопиримидинового ядра.

С целью разработки эффективного метода синтеза 4-амино-тетрагидропиридо[<3]пиримидинов в мягких условиях нами были изучены реакция соединений За-С и 4а,Ь^ с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и последующее нуклеофильное замещение ОТГ-группы аминами в 4-

трифторметансульфокситетрагидропиридо[с1]пиримидинах. Проведенное исследование показало, что добавление ангидрида трифторметансульфоновой кислоты к перемешиваемым при -70° С растворам соединений За-Г и 4а,Ь,с1,ё в сухом пиридине и последующее непродолжительное перемешивание реакционной смеси при комнатной температуре позволяет получать трифлатные производные 9я-{ и 10а-с1 с выходом 78-92%. Последние при кипячении с аминами в растворе 1,4-диоксана в течение 3 ч образуют 4-аминотетрагидропиридо[ё]пиримидины 11а^, 12а-и, 13а-!, 14а-е, 15,1ба-с, 17 и 18а,Ь с выходом 72-86% (схемы 2 и 3).

Схема 2

о 9"" ия,^

Чн "»* . Г I 1 | || т

7?оТ Д^охапе

За-1 9а» 11а-ч,12а-и,

13а-1, 14а-о, 16.

»•: Н«Мв вЬ: Я-ЫМа, «е: Я* М: й» ^ \> И: Я- 2-Ру И: Я' З-Ру

«: и.мв. ю-да. ^¡ь ь-^з а->{^-сонн1

'■(Ю -О-" "Оу'-р

Мв соын, сн,он

/-\ Мв /—\

Ч ( N .К—(\ / т М.' \ / М(Ме)ПВи

4—' Мв 4—' Н-» Й"0

о

о• М(СН2СН2ОМв)2 р. м(ме)вг1 Ч- N(N«8)0^0^(1

«: р ■ мме^ мя'^-«. ф ь. Ч^)—она- —СО^Нд * - ^-М» ».

я. о«^ ь. 1-00 "О-О

сомна сн,он

I- «0-От-м(мв)сн^он -ОЧЗг"

г~\ Р - ^_^|-СН,СН,ОН ч . г-О он •■•оо -СЬ

К - ь/ уэ »- о /—\ ь. ^о - л- уч-Рг

• - ^ ^—сонн, |. Х—' Мв "Яз -я сонм,

1«: Я-г-Ру ЫЯЧР-«. ы^] ►О /—ч е- _д-а

15: Р»3-Ру Ш'К»» ЧЕ1,

Bzb

^n^Y^nh Tf20 BzK Pyridine, -70°C

NR 4a,b,d,g

10a: R = Me ЮЬ: R = NMe2

16: R ■ Me, NR1R2 = а - \j-Me

OTf N

NR,R.

10a-d

16a-c,17,18a,b

10c: R = N^]

ь- oo

17: R-NMe2, NR1R2 = N^ ^—OH

/—\

18: R- 2-Py, NR1RJ =a- N

10d: R = 2-Py

b- Me.

3. Синтез 4-амино-7-арилметил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-с1]-пиримидинов

Традиционные методы введения заместителей в положение 7 5,6,7,8-тетрагидопиридо[3,4-с!]пиримидинов включают снятие каталитическим гидрированием бензильной группы при атоме азота в этом положении и последующее алкилирование вторичной аминогруппы хлор- либо бром-алканами. Такие реакции обычно протекают с выходом менее 60%. Нами был разработан эффективный метод получения новых 7-арилметилзамещенных производных 5,6,7,8-тетрагидопиридо[3,4-с1]пиримидинов имеющих свободную амино группу в положении 4 на примере соединений 9с и 9(1 на основе реакции восстановительного аминирования альдегидов вторичными аминами в присутствии ШНВ(ОАс)3 (схемы 4 и 5).

Схема 4

NH.OH

Hj/Pd-C

NH,

N _

V"« RCH=0 N NaHB(OAc),

О

i"

2, R- »-

.-Cr0" <.Q:0Me

OMe

I

OMe OH

OMe

OMe ' OMe '^Vi^-OE,

•ОЕ1

ВгГ

»¡4Нг N

отг щн2 (¡1Н2

ГгЧ Г^Лм ЫаНЩОАс), I И Т

к> к/А к^А к^о

9(1 ^^ 22 ^^ 23 24аЧ

ОМе ОМе ОМв 0Ме

-О * т0 е- -0 «

МеО ОМе оме

ОМе в-

Кипячение трифлатных производных 9с,<1 в смеси ДМФА с водным аммиаком в течение 12 ч давало амины 19 и 22 с выходом 70-75%. Гидрирование полученных аминов в растворе метанола в присутствии суспензии палладия на угле удаляло бензильные заместители, давая диамины 20 и 23 с выходом 80 и 88%. Последние легко взаимодействовали с альдегидами в присутствии №НВ(ОАс)з при перемешивании при комнатной температуре в растворах СН2С1г, образуя целевые соединения 21а-г и 24а-1 с выходом 72-78%.

Таким образом, нами впервые получены производные типа 21 и 24, содержащие в положении 4 еще один потенциальный реакционный центр — незамещенную аминогруппу. На наш взгляд, такие обьекты перспективны для дальнейших синтетических исследований в области тетрагидропиридо-пиримидинов.

4. Синтез 6-замещенных-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-ё]пирнмидинов

На примере соединений 4а,с,с! в данной работе продемонстрирована также возможность варьирования разнообразных заместителей в положении 6 тетрагидропиридопиримидиновой системы. С этой целью вначале были синтезированы незамещенные вторичные амины 25а-с (схема 6).

Гидрирование соединений 4а,с,с1 в растворе метанола в присутствии суспензии палладия на угле удаляло бензильные заместители, приводило к аминам 25а-с с выходом 84-92%. Последние являются удобными исходными соединениями для синтеза разнообразных 6-замещенных производных 5,6,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[4,3-<1]пиримидин-4-онов. Так, например, амины 25а-с

легко взаимодействуют с альдегидами в присутствии МаНВ(ОАс)3, образуя 6-арилметилзамсщенные 5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[4,3-с1]пиримидин-4оны 26а-б с выходом 74-82%. С другой стороны, ацилирование аминов 25а-с хлорангидридами карбоновых кислот позволяет получать разнообразные 6-ацилзамещенные производные 5,6,7,8-тетрагидро-3 Н-пиридо [4,3 -с1]пиримидин-4-онов. Используя данный тип реакций, нами были впервые получены соединения 27а-е с выходом 80-85%.

Схема 6

ОСа — ОСА ОСА

Ля,с,д 25а-с

26а-с1 о

А

МеСЫ N Мв

27а-е

25: 14= а- Ме , Ь-

0/~Л , с- ^_О .

26:а- к » ^ о ( ^ = —

Ме

27: К1 = а

Ь- П в Ме. в —; с- Я = Ме. ^ = —^^-ОМе ; с!- К = Ме. IV > ;

г сГ и Мв

Таким образом, соединения 25а-с проявляют свойства типичные для вторичных диалкиламинов и являются удобными синтонами для получения 6-замещенных тетрагидропиридо[4,3-с1]пиримидинов.

5. Синтез 7-арилметилзамещенных производных 2-пиридил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-с11пиримидин-4-онов

При поиске потенциальных биологически активных веществ особый интерес вызывали 2-пиридилзамещенные производные тетрагидропиридо[<1]-

пиримидинов. Однако, исследования реакций гидрирования соединений Зе-й показали, что наряду с удалением бензильной группы наблюдается частичное гидрирование пиридинового кольца, что приводит к образованию сложной смеси сразу нескольких продуктов. Поэтому в предшествующей части данной работы нами и был разработан метод синтеза соединений 7а-с, имеющих легко удаляемый при кислотном гидролизе т^е/я-бутоксикарбонильный заместитель в положении 7 тетрагидропиридопиримидинового ядра.

Схема 7

о

1,4-<Яохале НС1 Н1

1*СН=0 ын №НВ(ОАс),

г1

№

29а-Г ^

23: К. -^ОГМе ь-

|у1е

Схема 8

о о _ о

RCH=0

^ И I Н I 1 И I

7Ь N 28Ь N 30а-д N

1,4-сНохапв ЫаНВ(ОАс), (^"^у^мн

30: Я = л

О 7 п

о

о

о

НС1

31:

Кипячение соединений 7а-с в диоксане насыщеном НС1 в течение 2-3 ч приводило к аминам 28а-с с выходом 78-84%. Полученные амины легко взаимодействовали с разнообразными альдегидами в присутствии ЫаНВ(ОАс)з, образуя 7-арилметилзамещенные 2-пиридил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-ё]пиримидин-4оны 29а-£ ЗОа^ и 31а-1 с выходом 82-87% (схемы 7-9).

Строение соединений 29-31 было подтверждено необходимыми физико-химическими методами, в том числе с помощью ПМР спектроскопии и ЬС/МБ - спектрометрии.

6. Синтез б-арилметилзамещенных производных 2-пиридил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[4,3-с!]пиримидин-4-онов

Аналогично описанному выше способу получения соединений 29а^, ЗОа^ и 31а-1 нами были впервые синтезированы с выходом 78-84% изомерные тетрагидропиридопиримидины ЗЗа-Г, 34а-с и 35а-с, также представляющие интерес в качестве потенциальных ингибиторов вРСЯ рецепторов и киназ (схема 10).

Строение целевых продуктов 33-35 потверждено с помощью ПМР спектроскопии и ЬС/МБ - спектрометрии. Общими для всех спектров ПМР является наличие уширенного сигнала N-11 в области б 11-12 м.д. и три сигнала СНг групп пиперидинового цикла : синглет в области 5н 3,5 м.д. и два искаженных триплета в области 5Н 2,7 м.д.

Резюмируя последние две части нашей работы, можно утверждать, что производные 28а-с и 32а-с являются удобными интермедиатами для получения 7- и 6-арилметилзамещенных 2-пиридил-тетрагидропиридо[с1]пиримидинов.

Схема 10

7. 4-Амино-2-пиридил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[с1]пиримидины

На примере 2-пиридилпиримидинонов 29а-31а и 33а, 35а нам представлялось интересным изучить возможность модификации карбонильных групп в положении 4.

Действительно, 5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[с1]пиримидин-4-оны 29а-31а и 33а, 35а оказались удобными исходными соединениями для синтеза разнообразных 4-аминозамещенных тетрагидропиридо[с1]пиримидинов. Так, например, используя последовательные реакции этих соединений с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и аминами, нами впервые были получены 4-аминотетрагидропиридопиримидины 36,37а-с1, 38,39а,Ь и 40 с выходами 7486% (схемы 11 и 12).

п

Схема 11

29а

1.Tf2o Me

2.MeO(CH2)2NH2

1.Tf20

2.Me2N(CH2)2NH2 f

30a

1.Tf20

2.Et2N(CH2)2NH2

1.Tf20

2.Me2N(CH2)2NHMe

1.Tf20

2.Me2NCH2C(CH,)2CH2NH2 p

1.Tf20

2.EtO(CH2)2NH2

31a

/\,OMe

37b N

37c

N

37d

'-v^OEt

Строение целевых продуктов 36-40 также подтверждение ПМР спектроскопии и ЬС/МБ - спектрометрии. Как и следовало ожидать, в отличие от исходных соединений 29а-31а и 33а, 35а в спектрах ПМР веществ 36, 38-40 сигнал экзоциклического Ы-Н протона проявляется в более сильном поле приблизительно при 5н 5-6 м.д. в виде триплета.

8. Синтез новых гетероциклических систем на основе трифлатных производных 5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-с!]пиримидииов

Чтобы продемонстрировать возможности синтеза других гетероциклических систем на базе трифлатных производных тетрагидропиридопирими-динов 9а-:Г и 10а-с на примере соединения 10с мы изучили взаимодействие с 2-фуранбороновой кислотой, а также реакцию с гидразином .

При обработке три флата Юс 2-фуранбороновой кислотой в тетрагидро-фуране в инертной атмосфере в присутствии поташа и каталитических количеств (5 мольных %) тетракис(трифенилфосфин)палладия с высоким выходом был синтезирован фурилзамещенный продукт 41.

Непродолжительное кипячение трифлата 10с с гидразингидратом в этаноле давало 4-гидразино-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-<3]пиримидин 42 с выходом 65% (схема 13). Последний вступал в реакцию с этилксантогенатом калия при кипячении в этаноле, образуя тиол 43 с хорошим выходом. Алкилирование данного тиола 2-хлор->1-циклопропилацетамидом по БН-группе давало соединение 44 с выходом 60%. С другой стороны, реакция гидразина 42 с р-кетоэфиром при кипячении в этаноле в присутствии каталитических количеств толуолсульфокислоты приводила к образованию 4-пиразолил-замещенного производного 45 с выходом 67%. Гидразин 42 также легко вступал в реакцию с 1,Г-карбонилдиимидазолом при кипячении в этаноле, образуя с высоким выходом соединение 46. Наконец, кипячение гидразина 42 в триэтилортоформиате в течение 5 часов приводило к незамещенному по триазольному ядру гетероциклу 47 (схема 13).

Следует отметить, что соединения 43,44,46,47 являются представителями новой, неописанной в литературе, трициклической конденсированной системы 6,7,8,9-тетрагидро-1,2,За,5,8-пентаазациклопента[а]нафталина.

Схема 13

ы,н4-н,о ЕЮН

(73%).

N N-"4 ЕЮН

Г^н ЕЮт*к

V в

ЕЮН

Алой

42 иу Лиги

(65%)

45

О

(67%)

о ЕЮ1

ЕЮН

Д,зь

о

(60%)

(71%)

(76%)

Легкость протекания реакции нуклеофильного замещения СНГ-группы с последующей гетероциклизацией открывает путь к целому ряду новых гетероциклических систем с различным характером замещения в соответствующем гетероцикле. Весьма интересной выглядит возможность снятия бензильной защиты у насыщенного атома азота в случае соединений 41, 44-47, что открывает возможность их дальнейшей целенаправленной модификации.

9. Квантовохимические и масс-спектрометрические исследования

С целью детального изучения свойств полученных новых соединений в работе были проведены квантовохимические исследования молекул пиридо-пиримидинов За-й, 4а-], З'а-й, 4'а-], 3"а^ и 4"а-] с помощью полуэмпирического метода РМЗ. Квантовохимические расчеты в частности показали, что протоны в положениях 5, 6 и 8 молекул За^ и соответствующие им протоны в положениях 5, 7 и 8 молекул 4а-Г имеют примерно одинаковые эффективные заряды. Это согласуется с довольно близким сходством спектров ЯМР *Н изомерных 5,6,7,8-тетрагидропиридопиримидинов За-д и 4я-{ в области 5 2.4 - 3.8 м.д., где проявляются сигналы протонов их тетрагидропиридинового кольца.

Сравнение значений рассчитанных полных энергий молекул наиболее вероятных таутомеров За^/З'а^ и 4а^/4'а-] показало, что несколько более стабильными (на 0.4-0.5 ккал/моль) являются таутомерные формы Зa-g и 4а-Г Столь незначительное различие в энергиях для двух типов наиболее предпочтительных таутомеров указывает на то, что соединения За^ и 4г-Т в растворах при комнатной температуре могут находиться в динамическом равновесии с изомерными им таутомерами З'а-д и 4'а-С и вступать в реакции в ОН-формах. Получение трифлатов 9я-{ из ЗН-пиридопиримидин-4-онов За-Г экспериментально подтверждает данный вывод. В тоже время полная энергия таутомерных форм 3"а^ и 4"а-] выше на 8.1-8.3 ккал/моль и следовательно, присутствие этих таутомерных форм маловероятно.

Вг1

Вг1

Г*

'Вй

Н

За-д

З'а-д

М

Я

Я

В

н

4'а-1

Анализ масс-спектров электронного удара (70 эВ) соединений 13ач показал, что независимо от заместителей в положении 4 тетрагидропиридо-пиримидинового ядра, данные соединения имеют общую схему фрагментации, включающую образование фрагмента Ф-187 (схема 14).

Квантов'охимические расчеты молекулы 13а и ее катион-радикала М(+ •) (КР-13а) показали, что данные молекулы имеют аномально большой валентный угол С(4а)-С(4)-Ы по-видимому вследствие отталкивания пирролидинового заместителя от атомов водорода пиперидинового кольца.

При возбуждении молекулы 13а до состояния КР-13а наблюдается некоторое увеличение валентного угла С(4а)-С(4)-Ы и удлинение связей С(2)-N(3) и С(4а)-С(4) на фоне одновременного укорачивания связи С(8а)-Ы(1). Данные изменения геометрических параметров наглядно иллюстрирует начальную стадию элиминирования фрагментов Я^М-СИ молекулами тетрагидропиридопиримидинов 13ам при их возбуждении до состояний катион-радикалов.

Схема 14

Ф-187 (12-17%)

ео

13а

С(4а)-С(4)-Ы = 127.7° N(3) * С(4) - N =111.8°

КР-13а

С(4а)-С(4)-М = 127.9° Ы(3)-С(4)-М =111.1°

N(1) - С(8а> « 1.3651 А - С(8а) = 1.3310 А

^ С(2)-М(3) =1.3677 А С(2)"И(3) =1.3688 А -О С(4) - С(4а) = 1 -4223 А С(4) - С(4а) = 1.4443 А

9. Биологические испытания in silico и in vitro*

Важной составляющей данной работы было исследование биологических свойств полученных нами новых соединений. В качестве биологических мишеней были выбраны несколько доступных нам биологических объектов: серотониновые рецепторы подтипа 5НТ1А и дофаминовые рецепторы подтипа D2, относящиеся к классу GPCR (G-Protein Coupled Receptor - рецептор, сопряженный с G-белком), протеазные мишени подтипов DPP IV, CASPASE-3 и Cathepsin, протеинтирозинфосфатаза 1В (РТР 1В) и панель киназ, включающая GSK3B, Р38, Aurora A, CSK, LCK, JNK и ВТК киназы.

В результате проведенного предварительного компьютерного скрининга с использованием пакета программ S YB YL 7.2 были отобраны 63 соединения За-g, 4a-g, lla-q, 12a-u, 311,33e, 33f, 36, 37a-d, 39a-b, 40 для тестирования in vitro на протеазных мишенях DPP IV, CASPASE-3 и Cathepsin, а также GPCR-мишенях. Испытания in vitro соединений не выявили наличие у них какой-либо заметной активности по отношению к. мишеням DPP IV, CASPASE-3 и Cathepsin. Однако три соединения (llq, 12s и 37b) показали процент ингибирования 5НТ1А-рецепторов более 50% (таблица 1).

Полученные данные биологических испытаний впервые показали, что замещенные по положению 2 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-й]пиримидины, содержащие в положении 6 заместитель бензильного типа также могут обладать высокой биологической активностью и представлять интерес для создания новых лекарственных препаратов. При этом особенно перспективными являются 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-й]пиримидины, имеющие метальную либо диметиламиногруппу или 3-пиридил в положении 2 тетрагидропиридо^]пиримидинового ядра. Биологическая активность 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-0]пиримидинов также сильно зависит и от заместителей в положениях 4 и 7. Особенно активными являются 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4^]пиримидины, имеющие вторичные и третичные аминогруппы в положении 4 пиридопиримидинового ядра.

* ""автор выражает глубокую признательность сотрудникам лаборатории биоскрининга "ASINEX-Медхим" Афанасьеву И.И., Скосыреву B.C. и Малышевой Н.С. за проведение биологических испытаний.

Таблица 1.

Процент ингибирования СРСИ-рецепторов некоторыми 5,6,7,8-тетрагидропиридо [3,4-с1] пиримидинами

№ Структура Ингибирование 5НТ1А, % Ингибирование т, %

11с он 5 0

11Ч Ме.^-О N1' | Ме N ^ ^ ^ 68 16

12с он 0 Mв2N N ^^ 35 7

12в Сгон N 64 11 .

37а 41 0

37Ь 82 0

Таким образом, на основании биологических тестов нами впервые показано, что введение аминного фрагмента в положение 4 действительно приводит к увеличению процента ингибирования, в первую очередь для серотониновых рецепторов подтипа 5НТ1 А.

При виртуальном скрининге веществ на киназную активность использовался модуль Flex X программного пакета Sybyl 7.2. Отобранные в результате компьютерного скрининга соединения далее испытывались на биологическую активность в опытах in vitro. Для тестирования киназной активности были выбраны терапевтически значимые ферменты двух подклассов: серин-треони-новые киназы GSK3B, Р38, JNK, Aurora А, и тирозиновые киназы: LCK, CSK.

Результаты скрининга 163 веществ в отношение протеинкиназ обнаружили высокую активность 3 соединений (см. табл. 2). Наиболее низкие значения IC50 показывают соединения ЗЗе, 33f против тирозиновых протеинкиназ, при этом выявлена их селективность по сравнению с серин-треониновыми киназами. Напротив, соединение 311 селективно ингибирует серин-треони-новую киназу JNK3.

Таблица 2.

№ Структура Тип ингибируемой киназы Ингибирование, % (IC50, цМ)

311 сиЛи, ф ^ но JNK 96 (9)

ЗЗе у4]/ NH N^J CSK 97 (6)

33f Me Me J& 0 ^N^V^NH LCK 99 (3)

Полученные результаты ярко демонстрируют возможность использования данного класса соединений с целью поиска новых лекарственных препаратов на основе ингибиторов протеинкиназ.

ВЫВОДЫ

1. На основе реакций 1-бензил-3-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата и 1-бензил-4-оксопиперидин-З-этилкарбоксилата с замещенными амидинами и гуанидинами синтезирован ряд новых Ы-бензил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-с1] и [4,3-с1]пиримидин-4-онов с различными заместителями в положении 2 тетрагидропиридо[ё]пиримидинового ядра и легко удаляемой каталитическим гидрированием бензильной группой в положениях 6 или 7.

2. С помощью реакции 1-»гре/и-бутоксикарбонил-3-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата и 1-трет-бутоксикарбонил-4-оксопиперидин-3-этилкарбоксилата с пиридинкарбоксамидинами получены новые 6- и 7-т/>ет-бутоксикарбонил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-с1] и [4,3-dJ-пиримидин-4-оны с легко удаляемой кислотным гидролизом трет-бутоксикарбонильной группой в положениях 6 или 7.

3. Впервые показано, что последовательные реакции 5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[с1]пиримидин-4-онов с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и аминами позволяют получать в мягких условиях с высоким выходом соответствующие 4-амино-5,6,7,8-тетрагидропиридо[с1]пири-мидины.

4. Разработан универсальный метод введения разнообразных арилметиль-ных заместителей в положения 6 и 7 5,6,7,8-тетрагидропиридо[с1]-пиримидинов, используя последовательно реакции каталитического снятия бензильной защиты и последующего взаимодействия 5,6,7,8-тетрагидро-бН- и 7Н-пиридо[<1]пиримидинов с альдегидами в присутствии NaHB(OAc)3.

5. В общей сложности синтезировано более 150 новых 5,6,7,8-тетрагидро- ' пиридо[с!]пиримидинов. Среди полученных соединений проведен поиск / биологически активных веществ с помощью предварительного компьютерного моделирования и последующих испытаний на биомишенях серотониновых, дофаминовых рецепторов, а также протеазных и киназных мишенях in vitro. В результате проведенных испытаний выявлены 3 соединения, обладающие высоким процентом

связывания серотониновых рецепторов подтипа 5НТ1А и 3 вещества являющиеся селективными ингибиторами киназ GSK3B, JNK и LCK.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1. А.Ю.Кузнецов, Ю.А.Холопов, С.В.Чалышев, Н.Л.Нам. Синтез 4-амино-замещенных производных тетрагидропиридопиримидинов // Известия ТСХА, 2006, Вып. 2, С. 119-125.

2. А.Ю.Кузнецов, С.В.Чапышев, Н.Л.Нам. Синтез 7-арилметилзамещенных производных тетрагидропиридопиримидинов // Известия ТСХА, 2006, Вып. 3, С.90-97.

3. А.Ю.Кузнецов, С.В.Чапышев, Н.Л.Нам. Синтез 2-пиридилзамещенных производных тетрагидропиридопиримидинов // Известия ТСХА, 2006, Вып. 4,С.135-140.

4. А.Ю.Кузнецов, Ю.А.Холопов, С.В.Чапышев, Н.Л.Нам. Новые 5,6,7,8-тетрагидропиридо[с!]пиримидины // Сборник докладов III Международной конференции "Химия и биологическая активность азотсодержащих гетероциклов", Черноголовка, 2006, С. 162.

5. A.Yu.Kuznetsov, N.L.Nam, S.V.Chapyshev. Синтез новых 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-с1]пиримидинов // Сборник докладов Международной конференции "Органическая химия от Бутлерова и Бейльштейна до современности", Санкт-Петербург, 2006, С.294.

6. M.V.Kopyshev, A.Yu.Kuznetsov, N.L.Nam, S.V.Chapyshev. Синтез новых 5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-с1]пиримидинов // Book of Abstracts. 1st European Chemistry Congress, Budapest, 2006, P.329.

1,25 печ. л.

Тир. 100 экз.

Зак. 780.

Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА имени К. А. Тимирязева 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44

Введение.

Глава 1. Синтез и свойства пиридо[^ пиримидинов (литературный обзор)

1.1. Биологическая активность пиридо [^пиримидинов.

1.1.1. Пиридо[d]пиримидины в качестве антагонистов фолевой кислоты.

1.1.2. ПиридоИпиримидины в качестве ингибиторов тирозинкиназы.

1.1.3. ПиридоИпиримидины в качестве ингибиторов аденозинкиназы.

1.1.4. Противовоспалительная и противомикробная активность пиридоИпиримидинов.

1.2. Синтез пиридо[с/]пиримидинов.

1.2.1. Синтез пиридо[2,3-^пиримидинов.

1.2.1.1. Синтез пиридо [2,3-^пиримидинов из пиридинов.

1.2.1.2. Синтез пиридо [2,3-^пиримидинов из пиримидинов.

1.2.2. Синтез пиридо[3,2-йГ]пиримидинов.

1.2.2.1 Синтез пиридо[3,2-^]пиримидинов из пиридинов.

1.2.2.2 Синтез пиридо[3,2-с/]пиримидинов из пиримидинов.

1.2.2.3 Синтез пиридо[2,3-<^]пиримидинов из цианогуанидинов.

1.2.3 Синтез пиридо[3,4-й(]пиримидинов.

1.2.4 Синтез пиридо[4,3-(^пиримидинов.

1.2.4.1. Синтез из пиридинов.

1.2.4.2. Синтез из пиперидинов.

1.2.4.3. Синтез из алифатических кетонов.

1.2.4.2. Синтез из пиримидинов.

1.3. Реакции пиридо[б/]пиримидинов.

1.3.1. Реакции с участием пиримидинового кольца.

1.3.2. Реакции с участием пиридинового кольца.

Являясь структурными аналогами фолиевой кислоты, пиридо[3,4-^- и пиридо[4,3-с/]пиримидины эффективно ингибируют деятельность детидрофолатредуктазы (DHFR), вызывая гибель многих патогенных микроорганизмов (Pneumocystis carnii, Toxoplasma gondii, Parasitic protozoa и др.). Некоторые 4,7-дизамещенные производные 5,6,7,8-тетрагидропиридо[3,4-йГ|пиримидинов являются антагонистами щ-адреноцепторов и используются в медицине при лечении вегетативных нервных расстройств. Особенно большой интерес пиридо[с/]пиримидины привлекли к себе в последние годы в связи с обнаружением у них способности селективно ингибировать деятельность различных протеин-киназ. В настоящее время большое число разнообразных пиридо[3,4-d\- и пиридо[4,3-йГ]пиримидинов проходят разные стадии клинических испытаний в качестве противоопухолевых препаратов для лечения практически всех видов злокачественных опухолей. Кроме того, многие из этих же соединений оказались эффективными препаратами для лечения артритов, астмы, остеопороза, сердечной недостаточности, воспаления легких, атеросклероза и т.д. При этом направление и эффективность биологического действия пиридо[</]пиримидинов во многом зависит от заместителей в их пиридопиримидиновом ядре. Поэтому разработка новых универсальных методов синтеза различных замещенных производных пиридоИ-пиримидинов является актуальной проблемой.

Работа заключалась в разработке новых универсальных методов синтеза пиридо[3,4-б(|- и пиридо[4,3-с(]пиримидинов, имеющих самые разнообразные заместители в положениях 2, 4, 6 и 7 пиридопиримидинового ядра. Конкретные задачи работы включали:

- изучение ранее неописанных реакций 1-бензил-3-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата с амидинами для разработки общего метода синтеза 7-бензил-5Д7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[3,4-^пиримидин-4-онов с разными заместителями в положении 2 пиридопиримидинового ядра и легко удаляемой путем каталитического гидрирования бензильной группой;

- разработка метода синтеза новых 6- и 7-тиреш-бутоксикарбонил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридоИ-пиримидин-4-онов с легко удаляемой кислотным гидролизом трет-бутоксикарбонильной группой;

- разработка мягкого метода введения аминозаместителей в положение 4 пиридо[с/]пиримидинового ядра;

- разработка новых методов введения разнообразных арилметильных заместителей в положения 6 и 7 пиридо^пиримидинового ядра.

- В ходе выполнения работы были разработаны универсальные методы синтеза новых:

- 7-бензил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[3,4-^пиримидин-4-онов и 6-бензил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[4,3-£/]пиримидин-4-онов на основе реакций 1-бензил-3-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата и 1-бензил-4-оксопиперидин-3-этилкарбоксилата с амидинами;

- 7-«^е7и-бутоксикарбонил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[3,4-^]пиримидин-4-онов и 6- треш-бутоксикарбонил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[4,3-с/]пиримидин-4-онов на основе реакций 1- w^em-бутоксикарбонил-З-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата и 1- ш^еш-бутоксикарбонил-4-оксо-пиперидин-3-этилкарбоксилата с пиридилкарбоксамидинами;

- 4-амино-6- и 7-бензил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[б/]пиримидинов на основе последовательных реакций 5,6,7,8-тетрагидро-ЗЯ-пиридо[й?]пиримидин-4-онов с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и аминами;

- 6- и 7-арилметил-5,6,7,8-тетрагидропиридо[(/]пиримидинов на основе реакций 5,6,7,8-тетрагидропиридо[й?]пиримидинов с альдегидами в присутствии NaBH(OAc)3.

Разработанные новые методы синтеза разнообразных 2,4,6- и 2,4,7-замещенных производных 5,6,7,8-тетрагидропиридоИпиримидинов являются эффективными и универсальными и могут использоваться для получения различных биологически активных соединений в ряду пиридо[йГ|-пиримидинов. В общей сложности синтезировано более 150 новых 5,6,7,8-тетрагидропиридо[й?]пиримидинов, среди которых выявлены соединения с высокой биологической активностью.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на трех международных конференциях (III Международная конференция по химии и биологической активности азотсодержащих гетероциклов, Черноголовка, 2006; Международная конференция "Органическая химия от Бутлерова и Бейлынтейна до современности", Санкт-Петербург, 2006; I Химический конгресс, Будапешт, 2006).

По теме диссертации опубликовано 5 статей и 4 тезиса конференций, 4 статьи приняты в печать.

Синтез всех соединений выполнен лично автором. Соавторами научных работ были: к.х.н. H.JI. Нам (научный руководитель), д.х.н. С.В. Чапышев (научный консультант) и Ю.А. Холопов (студент-дипломник, синтез некоторых исходных амидинов).

ВЫВОДЫ

1. На основе реакций 1-бензил-3-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата и 1-бензил-4-оксопиперидин-З-этилкарбоксилата с замещенными амидинами и гуанидинами синтезирован ряд новых 1М-бензил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-(1] и [4,3-<1]пиримидин-4-онов с различными заместителями в положении 2 тетрагидропиридо[с!]пиримидинового ядра и легко удаляемой каталитическим гидрированием бензильной группой в положениях 6 или 7.

2. С помощью реакции 1-треш-бутоксикарбонил-3-оксопиперидин-4-этилкарбоксилата и 1-трет-бутоксикарбонил-4-оксопиперидин-3-этилкарбоксилата с пиридинкарбоксамидинами получены новые 6- и 7-ш/?ет-бутоксикарбонил-5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[3,4-с1] и [4,3-d]-пиримидин-4-оны с легко удаляемой кислотным гидролизом трет-бутоксикарбонильной группой в положениях 6 или 7.

3. Впервые показано, что последовательные реакции 5,6,7,8-тетрагидро-ЗН-пиридо[^]пиримидин-4-онов с ангидридом трифторметансульфоновой кислоты и аминами позволяют получать в мягких условиях с высоким выходом соответствующие 4-амино-5,6,7,8 -тетр аги дропирид о [d] пири-ми дины.

4. Разработан универсальный метод введения разнообразных арилметиль-ных заместителей в положения 6 и 7 5,6,7,8-тетрагидропиридо|\1]-пиримидинов, используя последовательно реакции каталитического снятия бензильной защиты и последующего взаимодействия 5,6,7,8-тетрагидро-бН- и 7Н-пиридоИпиримидинов с альдегидами в присутствии NaHB(OAc)3.

5. В общей сложности синтезировано более 150 новых 5,6,7,8-тетрагидро-пиридо [^пиримидинов. Среди полученных соединений проведен поиск биологически активных веществ с помощью предварительного компьютерного моделирования и последующих испытаний на биомишенях серотониновых, дофаминовых рецепторов, а также протеазных и киназных мишенях in vitro. В результате проведенных испытаний выявлены 3 соединения, обладающие высоким процентом связывания серотониновых рецепторов подтипа 5НТ1А и 3 вещества являющиеся селективными ингибиторами киназ GSK3B, JNK и LCK.

1. Иванский В.И., Химия гетероциклических соединений, Москва: Высшая школа, 1978.

2. Нсмеянов А.Н., Несмеянов Н.А., Начала органической химии, Москва: Химия, 1974, Т.2.

3. Irwin W.J., Wibberley D.G., Pyridopyrimidines: 1,3,5-, 1,3,6-, 1,3,7-, and 1,3,8-triazanaphtha-lenes, Adv. Heterocycl. Chem. 1969, Vol.10, p.149-198.

4. Lunt E., Newton C.G., Pyridodiazines and their benzo derivatives, Comprehensive Heterocyclic Chemistry 1984, Vol.3, Part 2B, p.201-232.

5. Taylor E.C., New pathways from pteridines. Design and synthesis of a new class of potent and selective antitumor agents. J. Heterocycl. Chem. 1990, Vol.27, No.l, p.1-12.

6. Bridges A.J., Chemical inhibitors of protein kinases. Chem. Rev. 2001, Vol.101, No.8,p.2541-2572.

7. Schindler Т., Bornmann W., Pellicena P., Miller W.T., Clarkson В., Kuriyan J., Structure mechanism for STI-571 inhibition of abelson tyrozine kinase. -Science 2000, Vol.289, p. 1938-1942.

8. Rewcastle G.W., Denny W.A., Showalter H.D.H., Synthesis of 4-(phenylamino)pyrimidine derivatives as ATP-competitive protein kinase inhibitors with potential for cancer chemotherapy. Current Org. Chem. 2000, Vol.4, No.7, p.679-706.

9. Daub H., Specht It, Ullrich A., Strategies to overcome resistance to targeted protein kinase inhibitors. Nature Reviews, Drug Discov., 2004, Vol.3., No. 12, p.1001-1010.

10. Rosowsky A., Mota C.E., Queener S.F., Brominated trimetrexate analogues as inhibitors of Pneumocystis carnii and Toxoplasma gondii dihydrofolate reductase. J. Heterocycl. Chem. 1996, Vol.33, No.6, p.1953-1966.

11. Troschutz R., Karger A., Versatile synthesis of 6-substituted 8-deazapteridine-2,4-diamines. Formal total synthesis of 8,10-dideazaminopterin. J. Heterocycl Chem. 1996, Vol.33, No.6, p.1815-1821.

12. Zink M., Lanig H., Troschutz R., Structural variations of piritrexim, a lipophilic inhibitor of human dihydrofolate reductase: synthesis, antitumor activity and molecular modeling investigations. Eur. J. Med. Chem. 2004, Vol.39, No.12, p.1079-1088.

13. Schonfeld F., Troschutz R., Synthesis of 5-substituted pyrido 2,3-^pyrimi dines as analogues of the antifolates methotrexate, DDANHF and piritrexim (LY231514). Heterocycles 2001, Vol.55, No.9, p.1679-1686.

14. Nakaya K, Miyasaka Т., A shikonin derivative, □ -hydroxyisovalerylshikonin, is an ATP-non-competitive inhibitor of protein tyrozine kinases. Anti-Cancer Drugs 2003, Vol.14, No.9, p.683-693.

15. Esteva F.J., Monoclonal antibodies, small molecules, and vaccines in the treatment of breast cancer. Oncologist 2004, Vol.9, No.l, p.4-9.

16. Grana T.M., Sartor G.I., Cox A.D., Epidermal growth factor receptor autocrine signaling in RIE-1 cells transformed by the Ras oncogene enhances radiation resistance. Cancer Res. 2003, Vol.63, No.22, p.7807-7814.

17. Nahta R., Esteva F.J., HER-2 targeted therapy: lessons learned and future directions. Clin. Cancer. Res. 2003, Vol.9, No.14, p.5078-5084.

18. Keshamouni V.G., Mattingly R.R., ReddyK.B., Mechanism of 17-beta-estradiol-induced Erkl/2 activation in breast cancer cells. A role for HER2 and PKC-delta. J. Biol Chem. 2002, Vol.277, No.25, p.22558-22565.

19. Motoyama A.B., Hynes N.E., Lane H.A., The efficacy of ErbB receptor-targeted anticancer therapeutics in influenced by the availability of epidermal growth factor-related peptides. Cancer Res. 2002, Vol.62, No.ll, p.3151-3158.

20. Kanstra S., Stoll S., Johnson J.L., Scr family kinase inhibitors block amphiregulin-mediated autocrine ErbB signaling in normal human keratinocytes. Mol. Pharmacology 2005, Vol.67, No.22, p.1145-1157.

21. Cow art M., Lee C.-H., Dfesser G.A., Bayburt E.K., Bhagwat S.S., Stewart A. O., Yu H., Mikusa J., Zhu C., Alexander KM., Jarvis M.F., Kowaluk E.A.,

22. Structure-activity studies of 5-substituted pyridopyrimidines as adenosine kinase inhibitors. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, Vol.11, No.l, p.83-86.

23. Rosowsky A., Papoulis A.T., Forsch R.A., Queener S.F., Synthesis and antiparasitic and antitumor activity of 2,4-diamino-6-(arylmethyl)-5,6,7,8-tetrahydroquinazoline analogues of piritrexim. J. Med. Chem. 1999, Vol.42, No.6, p.1007-1017.

24. Lan H., Ferlan J.T., Brophy V.H., Rosowsky A., Sibley C.H., Efficacies of lipophilic inhibitors of dehydrofolate reductase against parasitic protozoa. -Antimicrob. Agents Chemother. 2001, Vol.45, No.l, p.187-195.

25. Rosowsky A., Papoulis A.T., Queener S.F., One-step synthesis of novel 2,4-diaminopyrimidine antifolates from bridged alicyclic ketones and cyanoguanidine. J. Heterocyclic. Chem. 1999, Vol.36, No.4, p.723-728.

26. Rosowsky A., Chen H., A novel method of synthesis of 2,4-diamino-6-arylmethylquinazolines using palladium(0)-catalyzed organozink chemistry. J. Org. Chem. 2001, Vol.66, No. 15, p.7522-7529.

27. Connolly T.J., Matchett M., Sarma K., Process development and scale-up of a selective -adrenoceptor antagonist. Organic Research & Development 2005, Vol.9, No.l, p.80-87.

28. Оганисян А.Ш., Норавян А.С., Вартанян C.A., Пиридо2,3-^пиримидины. Успехи химиии 1987, Т.56, №12, с.2001-2027.

29. Бакибаее А.А., Яговкин А.Ю., Вострецов С.Н., Методы синтеза азотсодержащих гетероциклов с использованием мочевины и родственных соединений. Успехи химиии 1998, Т.67, №4, с.333-352.

30. Оганисян А.Ш., Норавян А.С., Григорян М.Ж., Конденсированные пиридопиримидины. 1. Синтез новых производныхпирано3',4':5,6.пиридо[2,3-^пиримидина. Химия гетероцикл. соедин. 1999, №9, с.1239-1241.

31. Оганисян А.Ш., Норавян А.С., Григорян М.Ж., Конденсированные пиридопиримидины. 6. Синтез новых пирано3',4':6,7.пиридо[2,3-с/]пиримидинов. Химия гетероцикл. соедин. 2003, №9, с.1372-1375.

32. А.Оганисян А.Ш., Норавян А. С., Григорян М.Ж., Конденсированные пиридопиримидины. 7. Синтез конденсированных триазоло-4,3-с.- и тетразоло[1,5-с]пиримидинов. Химия гетероцикл. соедин. 2004, №1, с.82-84.

33. Оганисян А.Ш., Норавян А.С., Григорян М.Ж., Конденсированные пиридопиримидины. 8. Синтез новых производных пирано3',4':6,7.пиридо[2,3-(7]пиримидина. Химия гетероцикл. соедин. 2004, №10, с.1554-1557.

34. Dave C.G., Patel K.J., Pyridopyrimidines. X. Synthesis of 3-substituted 2-thioxo-5,7-dimethylpyrido2,3-6/.pyrimidin-4(37/)ones and their S-alkylation under phase-transfer conditions. J. Heterocycl. Chem. 2001, Vo.38, No.2, p.457-461.

35. Girreser U., Heber D., Schutt M., Synthesis of 6-substituted 7-aryl-5,6-dihydropyrido2,3-c(.pyrimidin-(l^,37/)-2,4-diones using the Vielsmeier reaction. Tetrahedron 2Ш, Vol.60, No.50,p.ll511-11517.

36. Комков A.B., Дорохов B.A., 4-Амино-5-ацетилпиримидины эффективные реагенты в синтезе функционально замещенных пиридо2,3-й.пиримидинов. - Сборник тезисов Международной конференции по химии гетероциклических соединений, Москва: МГУ, 2005, с.206.

37. Комков А.В., Яковлев И.П., Дорохов В.А., Синтез производных пиридо2,3-7.пиримидин-7(8Н)-она из 5-ацетил-4-аминопиримидинов и бета-дикарбонильных соединений. Изв. АН, Сер. Хим. 2005, №3, с.784-788.

38. Комков А.В., Дорохов В.А., Простой метод получения алкил-5-оксо-5,8-дигидро- пиридо2,3-с/.пиримидин-7-карбоксилатов из 5-ацетил-4-аминопиридинов. Изв. АН, Сер. Хим. 2002, №10, с.1875-1878.

39. Комков А.В., Сахаров A.M., Богданов B.C., Дорохов В.А., 5-Ацетил-6-амино-4-метилтио-2-фенилпиридин и его использование в синтезефункционализированных пиридо2,3-^пиримидинов и пиримидо[4,5-фиримидинов. Изв. АН, Сер. Хим. 1995, №7, с. 1278-1282.

40. Комков А.В., ИгракБ.И, Богданов B.C., Дорохов В.А., Эффективный метод синтеза пиридо2,3-йГ.пиримидин-5-онов из 4-амино-5-ацетилпиримидинов. Изв. АН, Сер. Хим. 1994, №8, с. 1392-1397.

41. Хачатрян Д.С., Четвериков В.Ю., Холзинев С.Г., Уграк Б.И., Синтез и реакции пиридо-пиримидинтионов. Сборник тезисов Международной конференции по химии гетеро-циклических соединений, Москва: МГУ, 2005, с.343.

42. Anderson G.L., Richardson S.G., Synthesis of 5-oxo and 7-oxopyrido2,3-cdpyrimidines. J. Heterocycl. Chem. 1985, No.22, No.6 p.1735-1737.

43. Garcia J.A., Sanchez A., Nogueras M., Reaction of 6-aminopyrimidin-4-ones with diethyl ethoxymethylenemalonate in several media: synthesis of pyrido2,3-cdpyrimidines. J. Heterocycl. Chem. 1989, Vo.26, No.4, p. 10891092.

44. Colbry N.L., Elslager E.F., Werbel L.M., Synthesis and antimalatial properties of2,4-diamino-6-(aryl)thio, sulfinyl, and sulfonyl.pyrido[3,2-d]pyrimidine. J. Heterocycl. Chem. 1984, Vo.21, No.5, p.1521-1525.

45. De Graw J.I., Brown V.H., Synthesis of 2-amino-4-hydroxy-l,3,5-triazanaphthalenes. J. Heterocycl. Chem. 1976, Vo.13, No.2, p.439-441.

46. Temple C., Laseter A.G., Montgomery J.A., Synthesis and potential antimalaria agents. VIII. Azaquinozolines. II. Preparation of some 1,5-naphthyridines and pyrido3,2-J.pyrimidines. J. Heterocycl. Chem. 1970, Vo.7, No.4, p.1219-1222.

47. Dishington A.P., Johnson P.D., Kettle J.G., Synthesis of a 5-alkoxypyrido3,4-cf.pyrimiclin-4(3#)-one derivative via directed ortho-metallation of a pyridine analogue. Tetrahedron Lett. 2004, Vol.45, No.19, p.3733-3735.

48. Debeljak-Sustar M, Stanovnik В., Tisler M., Zrimsek Z., Neighboring group interaction in ortho-substituted aminopyridines. Pyridopyrimidine and related systems. J. Org. Chem. 1978, Vol.43, No.3, p.393-397.

49. Maguire J.H., McKee R.L., Condensation of benzoylcyanamide with aromatic amino esters, acids and amides. J. Org. Chem. 1974, Vol.39, No.23, p.3434-3435.

50. Berry D.J., Cook J.D., Wakefield B.J., Polyhalogenoaromatic compounds. Part XXIV. The reaction of chloropyridyl-lithium compounds with nitriles as a route to triazanaphthalenes. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1970, No. 17, p.2190-2192.

51. Berecz G., Reiter J., On triazoles. XLII. A new convenient method for the N-alkylation of highly insoluble cyclic amides. J. Heterocycl. Chem. 2001, Vo.38, No.l, p.237-252.

52. Reiter J., Rivo E., On triazoles. XVII. The reaction of 5-amino-1,2,4-triazoles with N-heterocyclic D-oxo-esters. J. Heterocycl. Chem. 1988, Vo.25, No.5, p.1497-1502.

53. Ткаченко Ю.Н., Цупак Е.Б., Шевченко M.A., Синтез g-аннелированных пиридо3,4-<фиримидин-2,4(1#,37/)-дионов. Сборник тезисов Международной конференции по химии гетероциклических соединений, Москва: МГУ, 2005, с.320.

54. Цупак Е.Б., Ткаченко Я.Н., Пожарский А. Ф., Пирролопиримидины. 1. Реакции электрофильного замещения 1,3-диметилпирроло3,4~ с(.пиримидин-2,4-диона. Химия гетероцикл. соедин. 1994, №9, с. 12421248.

55. Цупак Е.Б., Шевченко М.А., Пожарский А.Ф., Ткаченко Я.Н., Пирролопиримидины. 5. Взаимодействие б-амино-1,3-диметилгшрроло3,4-б/.пиримидин-2,4-(1Я,3/-/)-дионов с 1,3-дикетонами. -Химия гетероцикл. соедин. 2003, №7, с.1096-1102.

56. Lasar J., Bernath G., Saturated heterocycles. Part 172. Synthesis of 2,6-disubstituted 5,6,7,8-tetrahydrо4,3-<f.pyrimidines. J. Heterocycl. Chem. 1990, Vo.27, No.6, p.1885-1892.

57. Reiter J., Rivo E., On triazoles. XVIII. An unexpected rearrangement observed during the reaction of 5-amino-l,2,4-triazoles with N-heterocyclic □-oxo-esters. J. Heterocycl. Chem. 1989, Vo.26, No.4, p.971-980.

58. Berecz G., Reiter J., On triazoles. XL. Non catalytic dehalogenation of some 5-chloro-l,2,4-triazolol,5-fl.pyrimidine derivatives. J. Heterocycl. Chem. 1999, Vo.36, No.4, p.l 199-1211.

59. Hlavka J.J., Bitha P., Yang L, Strohmeyer Т., Synthesis and reactions of 2,3-diamino-4(3//)pyrimidones and 3-amino-2-hydrazino-4(377)pyrimidones. -J. Heterocycl. Chem. 1984, Vo.21, No.5, p.1537-1541.

60. Сусеило И., Полъските.Р., Тумкееичус С., Брукстус А., Новый метод синтеза пиридо4,3-йГ.пиримидинов. Химия гетероцикл. соедин. 2005, №2, с.298-300.

61. Kuznetsov A.Yu., Nam N.L., Chapyshev S.V., Synthesis of new 5,6,7,8-tetrahydropyriclo 3,4-<i.pyrimidines. Тезисы Международной конференции "Органическая химия от Бутлерова и Бейлынтейна до современности ", Санкт-Петербург, 26-29 июня 2006, с.294.

62. Kopyshev M.V., Kuznetsov A.Yu., Nam N.L., Chapyshev S.V., Synthesis of new 5,6,7,8-tetrahydropyrido4,3-ii.pyrimidines. Proceedings of 1st European Chemistry Congress, Budapest, 27-31 August 2006, p.325.

63. Кузнецов А.Ю., Холопов Ю.А., Чапышев С.В., Нам Н.Л., Синтез 4-аминозамещенных производных 7-бензил-2-морфолин-4-ил-5,6,7,8-тетрагидропиридо3,4-</.пиримидина. Известия ТСХА 2006, №2, с. 119125.

64. Кузнецов А.Ю., Чапышев С.В., Нам H.JI,. Синтез 7-арилметилзамещенных производных тетрагидропиридопиримидинов. -Известия ТСХА 2006, №3, с.90-97.

65. Кузнецов А.Ю., Чапышев С.В., Нам H.JI., Синтез 2-пиридилзамещенных производных тетрагидропиридопиримидинов. -Известия ТСХА 2006, №4, с. 135-140.

66. Кузнецов А.Ю., Чапышев С.В., Нам H.JI. Синтез 4-аминозамещенных производных 7-бензил-2-метил-5,6,7,8-тетрагидропиридо3,4-<7.пиримидина. Известия ТСХА 2006, в печати.

67. Кузнецов А.Ю., Нам Н.Л., Чапышев С.В., Синтез пиридо3,4-с/.пиримидинов на основе конденсации 1-бензил-3-оксопиперидил-4-этоксикарбоксилата с морфолин-4-карбоксамидином. Химия гетероцыкл. соедин. 2006, №11, c.l 111-1120.

68. Moreno-Mafias М., Perez М., Pleixats R., Palladium-catalyzed allylation of 3-hydroxyisoxazole, 5-isoxazolone and 5-pyrazolone systems. Tetrahedron 1994, Vol.50, No.2,p.515-528.

69. HyperChem, Release 6.03, Hypercube, Inc., 2000.

70. Bernatowitcz M.S., Wu Y, Matsueda G.R., 17/-Pyrazole- 1-carboxamidine hydrochloride: an attractive reagent for guanylation of amines and its application to peptide synthesis. J. Org. Chem. 1992, Vol.57, No.13, p.2497-2502.

71. Drager G., Solodenko W., Messinger J., Schon U., Kirschning A., A new reagent and its polymer-supported variant for the amidination of amines. -Tetrahedron Lett 2002, Vol.43, No.12, p.1401-1403.